循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的根源,外周血中CTCs的分離和檢測(cè)在腫瘤的早期診斷、療效監(jiān)測(cè)、耐藥性監(jiān)測(cè)、預(yù)后評(píng)估及個(gè)體化治療等方面都具有重要意義。本文基于流體力學(xué)技術(shù)、膜過濾技術(shù)和免疫熒光染色技術(shù)搭建了一套CTCs盤式分離裝置,建立了一套CTCs分離檢測(cè)方法;根據(jù)腫瘤細(xì)胞回收率和白細(xì)胞殘留率篩選了最適孔徑的分離膜;以肺癌細(xì)胞A549為細(xì)胞模型,通過構(gòu)建“A549+5 mL PBS檢測(cè)體系”和“A549+5 mL健康人靜脈血檢測(cè)體系”,進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià);將本文方法與韓國Clinomics公司的CD-PRIME設(shè)備進(jìn)行了比較;并使用本文方法對(duì)臨床患者血樣進(jìn)行了分離。結(jié)果表明:8μm孔徑的分離膜為最適分離膜;本文建立的分離方法總體穩(wěn)定性和重復(fù)性良好（CV<5%）;在5 mL PBS檢測(cè)體系中,腫瘤細(xì)胞的回收率為73.59%±2.14%,最低可檢測(cè)2個(gè)腫瘤細(xì)胞;在5 m L健康人靜脈血檢測(cè)體系中,腫瘤細(xì)胞的回收率為70.05%±5.89%,最低可檢測(cè)3個(gè)腫瘤細(xì)胞,即本文方法分離CTCs的最低檢測(cè)限為3個(gè)CTCs/5 mL外周血。本文建立的分離方法對(duì)腫瘤細(xì)胞的回收率（72.05%... 

【文章來源】：長(zhǎng)春理工大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)概述
    1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 常見的CTCs富集與分離技術(shù)
        1.2.2 常見的CTCs檢測(cè)與分析技術(shù)
        1.2.3 集富集分離與檢測(cè)分析于一體的綜合系統(tǒng)
    1.3 研究的目的及意義
    1.4 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 CTCs分離設(shè)備的研究與開發(fā)
    2.1 分離裝置的設(shè)計(jì)及工作原理
        2.1.1 分離儀
        2.1.2 分離盤
        2.1.3 分離膜
        2.1.4 分離操作流程
    2.2 圖像識(shí)別軟件的開發(fā)
    2.3 本章小結(jié)
第三章 CTCs分離檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 CTCs分離檢測(cè)方法的建立
        3.2.2 不同孔徑分離膜的篩選
        3.2.3 富集液的優(yōu)化
        3.2.4 穩(wěn)定性測(cè)試
        3.2.5 重復(fù)性測(cè)試
        3.2.6 PBS體系中腫瘤細(xì)胞回收率和檢測(cè)限的測(cè)定
        3.2.7 血液體系中腫瘤細(xì)胞回收率和檢測(cè)限的測(cè)定
        3.2.8 比對(duì)實(shí)驗(yàn)
        3.2.9 臨床血樣中CTCs的分離篩選
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 不同類型細(xì)胞分離染色結(jié)果
        3.3.2 不同孔徑分離膜的篩選結(jié)果
        3.3.3 富集液的優(yōu)化
        3.3.4 穩(wěn)定性測(cè)試
        3.3.5 重復(fù)性測(cè)試
        3.3.6 PBS體系中腫瘤細(xì)胞回收率和檢測(cè)限的測(cè)定
        3.3.7 血液體系中腫瘤細(xì)胞回收率和檢測(cè)限的測(cè)定
        3.3.8 比對(duì)實(shí)驗(yàn)
        3.3.9 臨床血樣中CTCs的分離篩選
    3.4 本章小結(jié)
第四章 腫瘤細(xì)胞中CK18基因mRNA表達(dá)量的檢測(cè)
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 靜脈血中分離出的肺癌A549細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)胞總RNA的提取
        4.2.3 cDNA的合成
        4.2.4 cDNA的鑒定
        4.2.5 A549細(xì)胞中CK18基因mRNA表達(dá)量的檢測(cè)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 靜脈血中分離出的肺癌A549細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        4.3.2 總RNA的提取
        4.3.3 cDNA普通PCR鑒定結(jié)果
        4.3.4 CK18基因mRNA表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果
    4.4 本章小結(jié)
第五章 腫瘤細(xì)胞中EGFR基因突變的檢測(cè)
    5.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 EGFR基因序列
        5.2.2 基于測(cè)序的EGFR基因突變檢測(cè)
        5.2.3 基于數(shù)字PCR的EGFR-T790M突變檢測(cè)
        5.2.4 基于數(shù)字PCR的EGFR-L858R突變檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 A549細(xì)胞EGFR基因突變測(cè)序分析
        5.3.2 基于微滴式數(shù)字PCR的T790M突變檢測(cè)結(jié)果
        5.3.3 基于微滴式數(shù)字PCR的L858R突變檢測(cè)結(jié)果
    5.4 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄A CD-PRIME操作說明
攻讀學(xué)位期間取得的成果
致謝



本文編號(hào)：3188744