黑色素瘤（Melanoma）是由黑色素細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而產(chǎn)生的惡性腫瘤之一,多發(fā)生于皮膚。皮膚惡性黑色素瘤多數(shù)由正常的痣和色素斑演變形成,其生長(zhǎng)速度快,轉(zhuǎn)移性強(qiáng),死亡率高,其發(fā)生的分子機(jī)制尚不完全清楚,探究其發(fā)病機(jī)制對(duì)黑色素瘤的機(jī)制闡明以及治療具有重要意義。圓柱瘤基因（Cylindromatosis,CYLD）是一種腫瘤抑制基因,其突變與人類家族性圓柱瘤等腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系。CYLD廣泛分布于人體細(xì)胞內(nèi),是一種與微管結(jié)合的去泛素化酶,可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的泛素化水平,在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和遷移等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。我們通過腫瘤基因組圖譜（the cancer genome atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫中的皮膚黑色素瘤患者樣本數(shù)據(jù),分析了CYLD在皮膚黑色素瘤中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其在患者中低表達(dá),其表達(dá)量與生存時(shí)間密切相關(guān),提示CYLD在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用。然而,CYLD在皮膚黑色素瘤中作用及其分子機(jī)制尚不完全清楚,基于此,本論文利用人惡性皮膚黑色素瘤細(xì)胞系,探究CYLD在腫瘤細(xì)胞增殖前移中的作用及其分子機(jī)制。本研究首先提取了腫瘤基因組圖譜（the cancer genome... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 黑色素瘤(Melanoma)
    1.2 圓柱瘤基因(Cylindromatosis,CYLD)
        1.2.1 圓柱瘤基因CYLD的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 圓柱瘤基因CYLD的結(jié)構(gòu)和特征
        1.2.3 CYLD在腫瘤中發(fā)揮的作用和機(jī)制
    1.3 泛素(Ubiquitin,Ub)和泛素化
        1.3.1 泛素
        1.3.2 泛素化
        1.3.3 泛素化在腫瘤中發(fā)揮的作用和機(jī)制
    1.4 核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin,NPM/B23)
        1.4.1 NPM結(jié)構(gòu)和特征
        1.4.2 NPM在腫瘤中發(fā)揮的作用和機(jī)制
    1.5 論文研究的目的和意義
第二章 CYLD在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 TCGA數(shù)據(jù)下載分析
        2.2.2 蛋白樣品制備
        2.2.3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
        2.2.4 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 TCGA臨床數(shù)據(jù)
        2.3.2 CYLD在皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞中下調(diào)
    2.4 分析與討論
第三章 CYLD對(duì)皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖與遷移影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 黑色素瘤穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
        3.2.2 EdU法檢測(cè)CYLD對(duì)皮膚惡性黑色素細(xì)胞增殖的影響
        3.2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CYLD對(duì)皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞遷移的影響
        3.2.4 蛋白樣品制備
        3.2.5 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 慢病毒感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.2 CYLD對(duì)皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
        3.3.3 CYLD對(duì)皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞遷移的影響
    3.4 分析與討論
第四章 CYLD抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖遷移的機(jī)制探討
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 蛋白樣品制備
        4.2.2 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
        4.2.3 考馬斯亮藍(lán)染色
        4.2.4 免疫沉淀實(shí)驗(yàn)IP(Immunoprecipitation)
        4.2.5 載體構(gòu)建
        4.2.6 數(shù)據(jù)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 篩選與CYLD互作的蛋白
        4.3.2 載體構(gòu)建與鑒定
        4.3.3 CYLD與 NPM互作
        4.3.4 CYLD降低NPM的泛素化水平
        4.3.5 CYLD調(diào)控黑色素瘤中PD-L1 的表達(dá)
    4.4 .分析與討論
第五章 討論與總結(jié)
    5.1 分析與討論
    5.2 結(jié)論
引用文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]NPM1在結(jié)直腸癌的表達(dá)及臨床價(jià)值[J]. 鄢超,毛瑞濤,馬淑霞,宋麗娜,王玲玲,何成彥,楊光遠(yuǎn),趙海豐.  標(biāo)記免疫分析與臨床. 2013(05)



本文編號(hào)：3183701