[研究目的]大量研究與臨床運(yùn)用表明雙特異抗體可以有效的治療腫瘤。成纖維活化蛋白FAP（fibroblast activation protein）是腫瘤微環(huán)境基質(zhì)中活化成纖維細(xì)胞表達(dá)的一種表面抗原,可以作為腫瘤的一種生物標(biāo)志。FAP在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。因此本課題擬構(gòu)建靶向于人FAP以及人T細(xì)胞表面CD3分子的雙特異性抗體。本課題首先設(shè)計(jì)雙特異性抗體結(jié)構(gòu),在確定結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上編輯抗體堿基序列,接下來(lái)包裝慢病毒,并利用該慢病毒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞（中國(guó)蒼鼠卵巢細(xì)胞）。通過(guò)這種生物工程方法表達(dá)設(shè)計(jì)好的雙特異性抗體,在進(jìn)行抗體提純之后進(jìn)行抗體分泌驗(yàn)證,確認(rèn)分泌后進(jìn)行抗體相關(guān)的功能驗(yàn)證,包括:結(jié)合能力驗(yàn)證、殺瘤能力驗(yàn)證。旨在研發(fā)靶點(diǎn)為人FAP/人CD3的雙特異性抗體類(lèi)藥物,從而更有效安全的治療腫瘤。[實(shí)驗(yàn)方法]1.雙特異性抗體的構(gòu)建:1.1雙特異性抗體序列設(shè)計(jì)（序列包括:signal peptide、His Tag、lingker、抗體可變區(qū)VH、VL）。2.雙特異性抗體的表達(dá):2.1雙特異性抗體相關(guān)序列慢病毒包裝與對(duì)照用空載體NC慢病毒包裝（包括:1.細(xì)胞培養(yǎng)2.病毒包裝3.病毒收集4.病毒... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
第一部分: 攜帶FAP蛋白基因的重組慢病毒的構(gòu)建
    一. 前言
    二. 材料與方法
        2.1. 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        2.2. 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
        2.3. 實(shí)驗(yàn)方法
    三. 結(jié)果
        3.1. 重組質(zhì)粒的酶切鑒定鑒定結(jié)果
        3.2. 測(cè)序分析
        3.3. 慢病毒感染宿主細(xì)胞
        3.4. Hm326抗體的表達(dá)檢測(cè)及抗體超濾純化
    四. 討論
    五. 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分: 雙特異性抗體的功能研究
    一. 前言
    二. 對(duì)象與方法
        2.1. 研究對(duì)象
        2.2. 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及儀器
        2.3. 主要的試劑和材料
        2.4. 實(shí)驗(yàn)方法
    三. 結(jié)果
        3.1 腫瘤組織中FAP蛋白的表達(dá)檢測(cè)
        3.2 構(gòu)建多個(gè)FAP蛋白過(guò)表達(dá)細(xì)胞系
        3.3 Hm326抗體與靶點(diǎn)結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        3.4 外周血誘導(dǎo)CIK細(xì)胞
        3.5 Hm326抗體體外殺瘤實(shí)驗(yàn)
    四. 討論
    五. 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章及科研項(xiàng)目情況
致謝



本文編號(hào)：3174908