發(fā)布時(shí)間：2021-04-28 21:57

　　現(xiàn)如今,癌癥成為威脅人類生命健康的一個(gè)重大疾病,聲動(dòng)力治療（SDT）由于其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),如無創(chuàng)性、高特異性、治療效果佳以及副作用小,引起了人們的廣泛關(guān)注�；钚匝酰≧OS）是聲動(dòng)力治療發(fā)揮抗腫瘤作用的關(guān)鍵活性物質(zhì),然而,腫瘤乏氧微環(huán)境以及腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶系的存在,導(dǎo)致SDT產(chǎn)生的ROS無法在腫瘤細(xì)胞內(nèi)有效蓄積,極大的降低了 SDT抗腫瘤效果。因此,提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)量成為增強(qiáng)聲動(dòng)力治療效果的關(guān)鍵。本課題選用具有高超聲敏感性和藥物儲(chǔ)庫(kù)功能的中空介孔二氧化鈦納米粒（MTN）為基體,有效負(fù)載化療藥物硫酸博來霉素（BLM）和氧氣飽和的全氟戊烷（PFP）,制備MTN-BLM-PFP。一方面,超聲誘導(dǎo)PFP發(fā)生液-氣相變以釋放氧氣,自供氧增加ROS的生成,BLM對(duì)超氧化物歧化酶（SOD）的抑制作用進(jìn)一步減少ROS的清除,開源節(jié)流提高ROS在腫瘤部位的蓄積;另一方面,BLM結(jié)合腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在的銅離子后實(shí)現(xiàn)活化,活化的分子會(huì)切割雙鏈DNA,進(jìn)一步殺傷腫瘤細(xì)胞。然后使用紅細(xì)胞膜（RBCm）對(duì)MTN-BLM-PFP進(jìn)行包封（RBCm-MTN-BLM-PFP,簡(jiǎn)稱為RMPB）,實(shí)現(xiàn)體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)和門控的作用,... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 前言
第二章 TKD@RMPB納米制劑的制備及表征
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 TTKD@RMPB的制備
            2.1.1 MTN的制備
            2.1.2 BLM的負(fù)載及含量測(cè)定
                2.1.2.1 構(gòu)建BLM的標(biāo)準(zhǔn)曲線
                2.1.2.2 確定投料比
            2.1.3 MTN-BLM-PFP的制備
            2.1.4 RBCm的制備
            2.1.5 TKD@RMPB的制備
        2.2 TKD@RMPB的表征
            2.2.1 透射電鏡(TEM)表征
            2.2.2 粒徑分布及Zeta電位表征
            2.2.3 氮?dú)馕?解吸實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 紫外-可見全波長(zhǎng)掃描
            2.2.5 熒光光譜掃描
        2.3 氧氣釋放的測(cè)定
        2.4 體外釋藥試驗(yàn)
        2.5 SDS-PAGE蛋白表征
            2.5.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建
            2.5.2 細(xì)胞膜蛋白的提取
            2.5.3 SDS-PAGE凝膠電泳
    3 結(jié)果與討論
        3.1 TKD@RMPB的表征
            3.1.1 MTN的氮?dú)馕?解吸實(shí)驗(yàn)
            3.1.2 TEM表征
            3.1.3 紫外-可見全波長(zhǎng)掃描
            3.1.4 SDS-PAGE蛋白表征
            3.1.5 熒光光譜掃描
            3.1.6 制劑的電位考察和粒徑分布
        3.2 載藥率和包封率的考察
            3.2.1 BLM含量測(cè)定的建立
            3.2.2 制劑的載藥率和包封率
        3.4 TKD@RMPB的超聲響應(yīng)特性考察
            3.4.1 MTN在超聲作用后的透射電鏡表征
            3.4.2 超聲作用后氧氣釋放的測(cè)定
            3.4.3 制劑的體外釋藥試驗(yàn)
    4 本章小結(jié)
第三章 TKD@RMPB納米制劑的體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器與設(shè)備
        1.2 試劑
        1.3 細(xì)胞株
        1.4 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.1 RAW264.7巨噬細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)胞的傳代
        2.2 HT-29和RAW264.7細(xì)胞對(duì)制劑的攝取實(shí)驗(yàn)
        2.3 超聲刺激下TKD@RMPB的細(xì)胞核定位
        2.4 細(xì)胞內(nèi)ROS的測(cè)定
        2.5 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        2.6 SRB法測(cè)定TKD@RMPB對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制率
            2.6.1 載體對(duì)HT-29細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
            2.6.2 制劑對(duì)HT-29細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        2.7 Calcein-AM/PI染色法測(cè)定HT-29細(xì)胞活性
    3 結(jié)果與討論
        3.1 HT-29和RAW264.7細(xì)胞對(duì)制劑的攝取實(shí)驗(yàn)
        3.2 細(xì)胞核定位能力
        3.3 細(xì)胞內(nèi)ROS的測(cè)定
        3.4 彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5 SRB法測(cè)定TKD@RMPB對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制率結(jié)果
        3.6 Calcein-AM/PI染色法測(cè)定HT-29細(xì)胞活性
    4 本章小結(jié)
第四章 TKD@RMPB納米靶向制劑的體內(nèi)活性研究
    1 儀器與試劑
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.0 HT-29荷瘤裸鼠模型的建立
        2.1 納米遞藥系統(tǒng)在HT-29荷瘤裸鼠的體內(nèi)組織分布實(shí)驗(yàn)
        2.2 藥代動(dòng)力學(xué)研究
        2.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組與操作方法
            2.3.2 H&E染色觀察病理變化
            2.3.3 免疫熒光染色檢測(cè)體內(nèi)ROS的產(chǎn)生
            2.3.4 免疫組化技術(shù)觀察腫瘤的乏氧狀況
            2.3.5 TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.4 肺纖維化的評(píng)估
    3 結(jié)果與討論
        3.1 納米遞藥系統(tǒng)在HT-29荷瘤裸鼠的體內(nèi)組織分布結(jié)果
        3.2 藥代動(dòng)力學(xué)研究
        3.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
            3.3.1 治療期間裸鼠腫瘤體積和體重的變化
            3.3.2 H&E染色觀察病理變化
            3.3.3 免疫熒光染色檢測(cè)體內(nèi)ROS的產(chǎn)生
            3.3.4 免疫組化技術(shù)觀察腫瘤的乏氧狀況
            3.3.5 TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.4 肺纖維化的評(píng)估
    4 本章小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3166243