乳腺癌是全球范圍內女性最常見的惡性腫瘤之一,也是引起女性死亡的重要病因,研究乳腺癌相關的分子機制具有重要的意義。人類中,MERIT40基因所在位點是首個被發(fā)現的三陰性乳腺癌的風險位點。并且,該基因外顯子區(qū)rs8170位TT基因型被發(fā)現與三陰性乳腺癌的高發(fā)病率相關。MERIT40蛋白是DNA雙鏈損傷修復復合體BRCA1-A的組成成員之一,它的功能是維持整個BRCA1-A復合體的穩(wěn)定性,促進復合體的組成并介導DNA損傷修復。為了探索MERIT40在乳腺癌中可能存在的新功能,我們實驗室以MERIT40為餌進行了蛋白質間相互作用的篩查后發(fā)現PHGDH與MERIT40之間存在相互作用,并且在葡萄糖饑餓刺激下會增強這種相互作用。PHGDH是糖酵解——絲氨酸生物合成途徑中的第一個分支酶,也是催化絲氨酸合成一系列反應的限速酶。許多研究證實,PHGDH高表達于多種乳腺癌中并與腫瘤細胞的生長息息相關,但其酶活調控機制仍不清楚。我們通過構建體外酶活測量體系發(fā)現,過表達MERIT40增強了PHGDH酶活力,而敲低MERIT40使PHGDH的酶活力降低了,體外回補MERIT40蛋白能夠在一定程度上挽救由于MER... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 乳腺癌
        1.1.1 乳腺癌簡介
        1.1.2 乳腺癌的流行現狀和趨勢
    1.2 MERIT40與乳腺癌
        1.2.1 MERIT40的簡介
        1.2.2 MERIT40的結構
        1.2.3 MERIT40的功能
        1.2.4 MERIT40與乳腺癌的關系
    1.3 磷酸甘油酸脫氫酶(PHGDH)
        1.3.1 PHGDH簡介
        1.3.2 PHGDH的結構
        1.3.3 PHGDH的調控
        1.3.4 PHGDH與腫瘤的關系
    1.4 立題背景
第二章 材料和方法
    2.1 DNA相關實驗
        2.1.1 表達質粒的構建
        2.1.2 干擾RNA表達質粒的構建
        2.1.3 DNA片段的純化
        2.1.4 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
        2.1.5 質粒DNA的提取
    2.2 細胞相關實驗
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 瞬時轉染
        2.2.3 慢病毒包裝
        2.2.4 慢病毒轉染
        2.2.5 細胞存活曲線測定
        2.2.6 基質膠侵襲實驗
        2.2.7 細胞死亡檢測
    2.3 蛋白質相關實驗方法
        2.3.1 蛋白質的表達和純化
        2.3.2 免疫共沉淀
        2.3.3 蛋白酶活的測定
        2.3.4 蛋白質的SDS-PAGE電泳與western blot
        2.3.5 考馬斯亮藍染色
    2.4 抗體和試劑
    2.5 實驗儀器
    2.6 免疫缺陷鼠腫瘤移植實驗
    2.7 統(tǒng)計分析
第三章 結果和討論
    3.1 結果
        3.1.1 酶活測量體系的構建
        3.1.2 MERIT40增強PHGDH的酶活
        3.1.3 MERIT40增強了腫瘤細胞抵抗葡萄糖饑餓環(huán)境的能力
        3.1.4 敲低MERIT40抑制小鼠乳腺原位移植瘤的生長
    3.2 討論
致謝
圖表索引
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3165236