目的:晚期惡性腫瘤的治療主要以放療、化療和靶向治療為主,多種方法綜合治療能夠改善晚期腫瘤患者的總生存,提高患者生活質(zhì)量,但總體獲益有限。如今,免疫治療,特別是免疫檢查點(diǎn)抑制劑已經(jīng)成為抗腫瘤治療的熱點(diǎn)和革新,為晚期腫瘤的治療提供了新的方法。在免疫檢查點(diǎn)通路中,程序性細(xì)胞死亡蛋白1（Programmed death-1,PD-1）及其配體（Programmed death-ligand-1,PD-L1）是其中的主要研究對(duì)象。兩者之間的結(jié)合能夠抑制T細(xì)胞的活化和功能,具有促進(jìn)腫瘤免疫逃逸、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的重要作用。PD-1或PD-L1單克隆抗體可以通過阻斷PD-1與PD-L1之間的連接來誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答。近年來,免疫檢查點(diǎn)抑制劑等各種類型的免疫療法已開展了眾多臨床試驗(yàn),并被批準(zhǔn)用于治療多種晚期惡性腫瘤。總體而言,單藥PD-1單抗治療的有效率較低,僅為10%～25%,而現(xiàn)有療效預(yù)測(cè)因子有限。因此,能夠有效預(yù)測(cè)抗PD-1治療療效生物標(biāo)志物的研究亟待開展。作為靶通路的關(guān)鍵因子,通過免疫組織化學(xué)法（immunohistochemistry,IHC）檢測(cè)在腫瘤組織中PD-L1的表達(dá),僅在晚期肺癌一線應(yīng)用... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :exosomal PD-L1 對(duì)晚期胃癌患者預(yù)后影響及其機(jī)制
    1前言
    2 材料與方法
        2.1 試劑
        2.2 儀器
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 病例收集
            2.3.2 血漿標(biāo)本收集
            2.3.3 Exosomes分離提純
            2.3.4 外周血單核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）分離
            2.3.5 流式細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.3.6 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞來源外泌體的收集
            2.3.7 ELISA法
            2.3.8 在線數(shù)據(jù)庫進(jìn)行免疫組化和生存分析
            2.3.9 透射電鏡
            2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 晚期胃癌患者一般情況
        3.2 晚期胃癌患者外泌體及exosomal PD-L1 的鑒定
        3.3 exosomal PD-L1、soluble PD-L1 在晚期胃癌患者血漿中的表達(dá)水平
        3.4 exosomal PD-L1、soluble PD-L1 表達(dá)對(duì)晚期胃癌患者預(yù)后的影響
        3.5 exosomal PD-L1 的單因素及多因素結(jié)果
        3.6 驗(yàn)證集中生存曲線驗(yàn)證exosomal PD-L1 對(duì)于晚期胃癌的預(yù)后價(jià)值
        3.7 時(shí)間依賴的ROC曲線檢測(cè)exosomal PD-L1 預(yù)后效率
        3.8 exosomal PD-L1 表達(dá)與T細(xì)胞數(shù)量、免疫相關(guān)細(xì)胞因子的關(guān)系
        3.9 在線數(shù)據(jù)分析免疫相關(guān)因子影響胃癌預(yù)后
        3.10 Exosomal PD-L1 促進(jìn)活化的T細(xì)胞凋亡
        3.11 Exosomal PD-L1 表達(dá)與耗竭型T細(xì)胞比例相關(guān)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :exosomal PD-L1 聯(lián)合CD28 預(yù)測(cè)晚期惡性腫瘤患者抗PD-1 治療療效
    6前言
    7 材料與方法
        7.1 試劑
        7.2 儀器
        7.3 實(shí)驗(yàn)方法
            7.3.1 病例收集
            7.3.2 血漿標(biāo)本收集
            7.3.3 Exosomes分離提純
            7.3.4 Western blot檢測(cè)蛋白水平
            7.3.5 ELISA法
            7.3.6 流式細(xì)胞計(jì)數(shù)
            7.3.7 MILLIPLEX多因子檢測(cè)
            7.3.8 透射電鏡
            7.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        8.1 可溶型PD-L1 和可溶型PD-1 無法預(yù)測(cè)抗PD-1 治療的反應(yīng)
            8.1.1 患者基本信息情況
            8.1.2 可溶型PD-L1、可溶型PD-1與PD-1 單抗治療療效無關(guān)
        8.2 外泌體鑒定以及exosomal PD-L1、exosomal PD-1 檢測(cè)
        8.3 基線exosomal PD-L1 高表達(dá)患者抗PD-1 治療療效更差
            8.3.1 基線exosomal PD-L1 水平與治療療效關(guān)系
            8.3.2 exosomal PD-L1 的動(dòng)態(tài)變化與腫瘤負(fù)荷、療效評(píng)價(jià)一致
        8.4 基線exosomal PD-1 高表達(dá)患者抗PD-1 治療療效更差
            8.4.1 基線exosomal PD-1 水平與治療療效關(guān)系
            8.4.2 exosomal PD-1 的動(dòng)態(tài)變化與腫瘤負(fù)荷、療效評(píng)價(jià)一致
        8.5 exosomal PD-L1 高表達(dá)與縮短的PD-1 單抗治療PFS時(shí)間相關(guān)
            8.5.1 應(yīng)用X-tlie選取各指標(biāo)截?cái)嘀?br>            8.5.2 PD-1單抗治療PFS的影響因素
        8.6 PD-1單抗治療有效組共刺激因子高表達(dá)
        8.7 共刺激因子高表達(dá)與PD-1單抗PFS時(shí)間延長(zhǎng)相關(guān)
        8.8 PD-1單抗治療有效組共抑制因子高表達(dá)
        8.9 共抑制因子高表達(dá)與PD-1單抗PFS時(shí)間延長(zhǎng)相關(guān)
        8.10 T淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子不能預(yù)測(cè)PD-1抑制劑的療效
        8.11 exosomal PD-L1和CD28為PD-1 單抗治療PFS的獨(dú)立影響因素
            8.11.1 單因素分析顯示exosomal PD-L1 高表達(dá)、共刺激因子低表達(dá)為PD-1 單抗治療無進(jìn)展生存期的不良因素
            8.11.2 多因素分析顯示exosomal PD-L1和CD28是PD-1 單抗治療療效的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素
            8.11.3 亞組分析exosomal PD-L1和CD28對(duì)PD-1 單抗治療PFS的影響
        8.12 Exosomal PD-L1與CD28 聯(lián)合預(yù)測(cè)PD-1 單抗的療效更好
            8.12.1 ROC曲線評(píng)價(jià)兩指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)效率
            8.12.2 兩指標(biāo)聯(lián)合陽性患者具有更長(zhǎng)的無進(jìn)展生存期,更可能從PD-1單抗中獲益
            8.12.3 列線圖反應(yīng)兩指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)PFS
        8.13 亞組分析驗(yàn)證模型對(duì)PD-1單抗療效的預(yù)測(cè)
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :生物信息學(xué)建立肺鱗癌中免疫炎癥型基因模型及免疫治療療效預(yù)測(cè)
    11前言
    12 材料與方法
        12.1 肺鱗癌基因表達(dá)文件下載
        12.2 單樣本基因集富集分析（ss GSEA）評(píng)估免疫細(xì)胞浸潤(rùn)
        12.3 加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（WGCNA）
        12.4 基因語義注釋（GO term）功能富集分析
        12.5 關(guān)鍵基因（hub gene）的定義
        12.6 最小絕對(duì)收縮和選擇算子（LASSO）簡(jiǎn)化基因模型
    13 結(jié)果
        13.1 從TCGA、GSE50081 肺鱗癌數(shù)據(jù)集中篩選免疫相關(guān)模塊
        13.2 兩數(shù)據(jù)集得到的模塊功能富集與免疫過程相關(guān)
        13.3 TCGA天青模塊僅與免疫炎癥型顯著正相關(guān)
        13.4 兩數(shù)據(jù)集Hub基因的交集與免疫功能相關(guān)
        13.5 51Hub基因僅與免疫炎癥型顯著正相關(guān)
        13.6 尿路上皮癌研究結(jié)果證實(shí)51基因模型與免疫炎癥型密切相關(guān),并與抗PD-L1治療有效相關(guān)
        13.7 7基因模型與免疫炎癥型密切相關(guān),并與抗PD-L1治療有效相關(guān)
        13.8 7基因模型陽性閾值的確定
        13.9 7基因的共線性和功能
        13.10 7基因模型在TCGA數(shù)據(jù)集中篩選炎癥型肺鱗癌
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3161042