發(fā)布時(shí)間：2021-04-23 12:20

　　組蛋白賴(lài)氨酸特異性去甲基化酶（Histone lysine specific demethylase 1,LSD1）是在2004年發(fā)現(xiàn)的第一種組蛋白去甲基化酶。LSD1能夠以黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin adenine dinucleotide,FAD）依賴(lài)性酶催化氧化的方式去除組蛋白H3K4和H3K9的單雙甲基。蛋白neddylation修飾作為一種類(lèi)泛素化修飾,是機(jī)體發(fā)揮正常功能的調(diào)節(jié)方式,然而在腫瘤及神經(jīng)退行性等疾病中卻發(fā)生異�；罨�,neddylation通路E1激活酶NAE的抑制劑MLN4924已經(jīng)進(jìn)入臨床前研究,發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種腫瘤都有很好的抑制活性。然而最近研究發(fā)現(xiàn)MLN4924在腫瘤治療過(guò)程中出現(xiàn)抗性,以及neddylation通路的E2結(jié)合酶UBE2M被證實(shí)在肺癌中是一種很好的治療靶點(diǎn)。課題組前期發(fā)現(xiàn)LSD 1可以增強(qiáng)胃癌細(xì)胞MGC-803的遷移和侵襲。本文意在研究（1）LSD1是否存在neddylation修飾以及UBE2M是否會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響;（2）UBE2M是否對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖與遷移產(chǎn)生影響以及LSD1在其中是否發(fā)揮作用。（1）LSD1與UBE2M/UBE2F在胃癌... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
1 前言
    1.1 表觀遺傳學(xué)
    1.2 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)
    1.3 DNA甲基化
    1.4 組蛋白的共價(jià)修飾
        1.4.1 甲基化修飾
        1.4.2 乙�；揎�
        1.4.3 磷酸化修飾
        1.4.4 其它修飾
    1.5 LSD1
        1.5.1 LSD1的結(jié)構(gòu)與功能
        1.5.2 LSD1在癌癥發(fā)生與進(jìn)展中的作用
    1.6 蛋白的neddylation修飾
        1.6.1 NEDD8的結(jié)構(gòu)
        1.6.2 Neddylation修飾的相關(guān)作用酶
        1.6.3 以neddylation修飾為靶點(diǎn)的抗腫瘤研究
    1.7 EMT
    1.8 本論文的主要研究目的和研究?jī)?nèi)容
2 UBE2M與LSD1在胃癌組織中表達(dá)量的相關(guān)性分析
    引言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 常用溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 免疫組化
        2.2.2 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 LSD1與UBE2M在胃癌組織中表達(dá)量的相關(guān)性分析
        2.3.2 LSD1與UBE2F在胃癌組織中表達(dá)量的相關(guān)性分析
    小結(jié)
3 LSD1 neddylation修飾的確定及LSD1與UBE2M相互作用的研究
    引言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代與凍存
        3.2.2 蛋白質(zhì)的提取
        3.2.3 BCA蛋白定量
        3.2.4 Western-blot實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        3.2.9 蛋白質(zhì)譜分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 質(zhì)譜分析UBE2M與LSD1的相互作用以及鑒定LSD1的neddylation修飾
        3.3.2 UBE2M與LSD1存在共定位
        3.3.3 UBE2M與LSD1蛋白間存在著結(jié)合作用
    小結(jié)
4 UBE2M相互作用蛋白對(duì)于LSD1 neddylation修飾作用影響以及UBE2M對(duì)LSD1蛋白表達(dá)量的調(diào)節(jié)
    引言
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 Western-blot實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 體外neddylation實(shí)驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 利用UBE2M抗體免疫共沉淀得到的蛋白復(fù)合物可以促進(jìn)重組LSD1的neddylation修飾
        4.3.2 胃癌細(xì)胞中敲低以及過(guò)表達(dá)UBE2M后LSD1表達(dá)量的變化
    小結(jié)
5 UBE2M對(duì)胃癌細(xì)胞增殖與遷移性能的調(diào)控及LSD1在其中作用的研究
    引言
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 MTT實(shí)驗(yàn)
        5.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        5.2.4 Western-blot實(shí)驗(yàn)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 敲低UBE2M對(duì)于六種胃癌細(xì)胞增殖的影響
        5.3.2 過(guò)表達(dá)UBE2M對(duì)于六種胃癌細(xì)胞增殖的影響
        5.3.3 敲低UBE2M對(duì)于胃癌細(xì)胞MGC-803和MGC-803 （LSD1 knockout）遷移的影響
        5.3.4 過(guò)表達(dá)UBE2M對(duì)于胃癌細(xì)胞MGC-803和MGC-803 （LSD1 knockout）遷移的影響
    小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷與研究成果
    個(gè)人簡(jiǎn)歷
    碩士在讀期間論文發(fā)表成果
    研究生期間的榮譽(yù)與獎(jiǎng)勵(lì)
致謝



本文編號(hào)：3155318