目的:檢測(cè)促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞受體A2（EphA2）蛋白在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其參與調(diào)控肝癌細(xì)胞侵襲的可能機(jī)制。方法:培養(yǎng)人肝細(xì)胞HL-7702和肝癌細(xì)胞株MHCC97H、Hep3B,采用siRNA干擾法抑制肝癌細(xì)胞中EphA2、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2（Grb2）的表達(dá),設(shè)立未處理組（未處理肝癌細(xì)胞）,對(duì)照組（加入對(duì)照siRNA）和siRNA干擾組（加入siRNA干擾EphA2或Grb2）,Western blot法檢測(cè)不同處理前后細(xì)胞中EphA2、Grb2蛋白的表達(dá)情況,Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲性。結(jié)果:體外侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MHCC97H、Hep3B、HL-7702穿透細(xì)胞的數(shù)量分別為:（401±3）/10HPF、（111±4）/10HPF、（31±3）/10HPF,人正常肝細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,EphA2、Grb2蛋白在人正常肝細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;siRNA抑制EphA2表達(dá)后,Hep3B和MHCC97H細(xì)胞系未處理組、對(duì)照組、siRNA干擾組穿透的細(xì)胞數(shù)量分別為:（111±4）... 

【文章來(lái)源】：西安醫(yī)學(xué)院陜西省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

使用Transwell小室檢測(cè)HL-7702、Hep3B和MHCC97H細(xì)胞的穿透細(xì)胞數(shù)，與HL-7702相比，P＜0.05,＃與Hep3B相比，P＜0.05

圖 1：使用 Transwell 小室檢測(cè) HL-7702、Hep3B 和 MHCC97H 細(xì)胞的穿透細(xì)胞數(shù)， 與 HL-7702 相比，P＜0.05,＃與 Hep3B 相比，P＜0.05。2 Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果EphA2 蛋白、Grb2 蛋白在人正常肝細(xì)胞株 HL-7702 和肝癌細(xì)胞株 MHCC97H、Hep3B 的表達(dá)如圖所示，人正常肝細(xì)胞細(xì)胞株 HL-7702 和肝癌細(xì)胞株 MHCC97H、Hep3B 表 達(dá) 相 比 ， 差 異 均 具 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （ P<0.05 ）， 見(jiàn) 圖 2 。

西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文25⑥將上述500μL的混合液加入6孔板內(nèi)，充分混勻；⑦將6孔板置于孵箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4-6h，用原培養(yǎng)基替換上述培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h，后收集細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組：未處理組（未進(jìn)行任何轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞），對(duì)照組（加入對(duì)照siRNA）和siRNA干擾組（加入siRNA干擾EphA2）。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果1Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果體外侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示400倍顯微鏡下肝癌細(xì)胞株MHCC97H未處理組、對(duì)照組、siRNA干擾組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為（405±5）/10HPF、（399±4）/10HPF、（155±7）/10HPF，肝癌細(xì)胞株Hep3B未處理組、對(duì)照組、siRNA干擾組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為（111±4）/10HPF、（108±5）/10HPF、（53±3）/10HPF，siRNA干擾組較對(duì)照組明顯降低（P<0.05），見(jiàn)下圖3、4。圖3：siRNA干擾法抑制EphA2表達(dá)后，Transwell小室檢測(cè)肝癌細(xì)胞Hep3B和MHCC97H的穿透細(xì)胞數(shù)，與對(duì)照組相比，P＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3140600