目的:本研究通過將丙戊酸鈉作用于體外培養(yǎng)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系RPMI8226以及U266細(xì)胞株,結(jié)合多種自噬流檢測方法,觀察兩細(xì)胞系自噬流的情況,從而全面準(zhǔn)確地反映自噬過程,探討自噬過程參與多發(fā)性骨髓瘤疾病發(fā)生及進(jìn)展的分子生物學(xué)機(jī)制,為丙戊酸鈉用于臨床治療提供理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)人源性多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226以及U266細(xì)胞株,取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于后續(xù)實驗。將實驗細(xì)胞分為4組并分別給予不同處理:空白對照組、丙戊酸鈉組（8mmol/L）、氯喹組（8μg/ml）以及兩藥聯(lián)合組。以細(xì)胞計數(shù)試劑盒8（CCK8）分別檢測藥物處理6h、12h、24h、48h的細(xì)胞增殖抑制情況;經(jīng)查,觀察細(xì)胞自噬情況時細(xì)胞的增殖抑制率不可太低也不可太高,20%-30%為宜,因此根據(jù)增殖抑制率選定本實驗的藥物處理時間為24小時,完成后續(xù)實驗。采用實時定量PCR法檢測自噬標(biāo)志性蛋白LC3B的mRNA相對表達(dá)水平;蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）用于驗證LC3B的翻轉(zhuǎn)實驗,即不同藥物處理組間LC3B蛋白的表達(dá)情況;應(yīng)用Cyto-ID自噬檢測試劑盒進(jìn)行熒光染色,用流式細(xì)胞儀檢測各組自噬陽性細(xì)胞的平... 

【文章來源】：承德醫(yī)學(xué)院河北省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫
前言
材料與方法
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 自噬檢測相關(guān)研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3134702