目的:探究鈣調磷酸酶PPP3CB與轉錄因子TWIST1相互作用調控腎癌（Renal cell carcinoma,RCC）發(fā)生發(fā)展,并闡述其機制。方法:基于課題組以往研究中質譜分析結果顯示,PPP3CB在上皮樣腎臟間充質細胞m K4中高表達,在間質樣腎臟間充質細胞m K3細胞中低表達,因此我們進一步在腎癌細胞系中研究PPP3CB是否在腎癌上皮間質轉化（EMT）及發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮調節(jié)作用。腫瘤蛋白數據庫分析顯示,PPP3CB低表達于腎癌組織,因此我們在腎癌細胞系786-O和OSRC-2中進行如下實驗:體外,在786-O和OSRC-2細胞中通過慢病毒感染方式,構建PPP3CB過表達和敲低的穩(wěn)定細胞系或利用lipofectamine2000轉染si RNA-PPP3CB;通過劃痕/Transwell實驗,檢測PPP3CB對細胞遷移能力的影響,通過Western-blot和免疫熒光實驗檢測PPP3CB對EMT過程及TWIST1的影響,鬼筆環(huán)肽染色F-actin檢測細胞骨架改變;在HEK 293FT細胞中,通過Co-IP實驗檢測PPP3CB與TWIST1相互作用;在PPP3CB穩(wěn)定細胞系或轉染si... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PPP3CB在腎癌細胞中低表達Figure1PPP3CBwasexpressedlowerinRCCcell

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文41圖2.1流式細胞凋亡檢測顯示PPP3CB促進786-O細胞凋亡Figure2.1PPP3CBacceleratedcellapoptosisin786-Ocell

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文42圖2.2PPP3CB促進剪切的促凋亡蛋白Caspase3表達Figure2.2PPP3CBfacilitatedtheexpressionofpro-apoptoticproteincleaved-Caspase3in786-OandOSRC-2cell此外，為探討PPP3CB對細胞增殖的影響，我們針對慢病毒敲低的786-O細胞，進一步通過CCK-8實驗檢測細胞活力，結果表明敲低PPP3CB后細胞活力受到抑制，差異有統(tǒng)計學意義，但并不非常顯著（圖2.3A）。為得到更確切的結果，我們在786-O細胞中通過siRNA高效率沉默PPP3CB，重復CCK-8實驗，結果與shRNA干預結果一致，且差異非常顯著（圖2.3B-C）。同時，我們進行EdU細胞增殖實驗，從另一方法學角度明確敲低PPP3CB對細胞增殖的抑制作用（圖2.3D-E）。這些結果表明PPP3CB促進細胞凋亡，抑制細胞增殖。


本文編號：3131293