發(fā)布時(shí)間：2021-04-07 08:29

　　乳腺癌是威脅女性健康最常見的癌癥之一,其中三陰性乳腺癌的治療更為棘手。乳腺癌的臨床治療主要以切除或化療為主,但很大程度上面臨著耐藥和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。藥物聯(lián)合策略在近幾年被廣泛用于臨床,能有效減少因單一藥物化療而產(chǎn)生的不良副作用,也有助于克服乳腺癌臨床治療中常見的耐藥性。HSP90和HDAC作為在治療癌癥疾病中潛在的靶點(diǎn),具有重大的研究意義。在本研究中,HSP90抑制劑17-AAG和HDAC6抑制劑Belinostat處理不同類型的乳腺癌細(xì)胞,通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測抑制劑對各種乳腺癌細(xì)胞的聯(lián)用指數(shù)（CI）差異,再通過RNA測序技術(shù)和細(xì)胞劃痕遷移等實(shí)驗(yàn)探究藥物聯(lián)用組合在三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中的相關(guān)機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)17-AAG和Belinostat聯(lián)用在三陰性乳腺癌中具有較高的敏感性,與單藥相比,聯(lián)合用藥使得MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制和凋亡率均顯著提高,三個(gè)濃度組的聯(lián)用指數(shù)均小于1。初步探究給藥組對HSP90、tubulin和HDAC6調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的影響。RNA測序數(shù)據(jù)分析顯示,藥物聯(lián)用組的差異顯著基因與細(xì)胞遷移密切相關(guān),TEAD家族蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低,YAP的... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

三陰性乳腺癌治療藥物的結(jié)構(gòu)式

第1章引言6應(yīng)激和細(xì)胞死亡是相互聯(lián)系的，響應(yīng)應(yīng)激而誘導(dǎo)的HSP似乎在細(xì)胞凋亡控制的關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn)起重要作用。HSP的抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白與多種細(xì)胞蛋白相互作用，它們的表達(dá)水平可以決定細(xì)胞應(yīng)激死亡。伴侶蛋白通常根據(jù)其分子量分為HSP40、HSP60、HSP70、HSP90、HSP100和小分子HSPs，它們參與多種蛋白質(zhì)組的維護(hù)，包括從頭折疊、變性蛋白質(zhì)的重折疊、寡聚組裝、蛋白質(zhì)運(yùn)輸和蛋白水解降解的幫助。其中HSP70的HSC70和應(yīng)激誘導(dǎo)型形式是蛋白質(zhì)折疊和蛋白穩(wěn)態(tài)控制中的重要角色。研究表明，增加HSP70水平可有效預(yù)防疾病模型中的毒性蛋白質(zhì)聚集[39]。HSP90是一種分子伴侶蛋白，它與促進(jìn)癌細(xì)胞生長和生存的多種突變、嵌合和過表達(dá)的信號蛋白的穩(wěn)定性和功能相關(guān)。HSP90形成了一個(gè)蛋白質(zhì)穩(wěn)定中心，控制著真核細(xì)胞中許多重要的信號通路，這些功能包括細(xì)胞周期進(jìn)程、端粒維持、細(xì)胞凋亡、有絲分裂信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、囊泡介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)、先天免疫和靶向蛋白質(zhì)降解等[40]。如圖1.2所示，總結(jié)了HSP90部分胞內(nèi)胞外的客戶蛋白，胞內(nèi)研究的客戶蛋白已經(jīng)超過了100種。圖1.2細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外HSP90客戶蛋白的部分列表[41]已有報(bào)道全長的HSP90晶體結(jié)構(gòu)，提供給人們許多有用的信息[42]。HSP90是由其C端結(jié)構(gòu)域組裝亞基的二聚體，N末端結(jié)構(gòu)域結(jié)合并水解ATP，并通過中間結(jié)構(gòu)域與C末端結(jié)構(gòu)域連接。中間結(jié)構(gòu)域參與底物結(jié)合并與AHA1相互作用。與其他分子伴侶相似，HSP90二聚體經(jīng)歷了ATP驅(qū)動(dòng)的反應(yīng)循環(huán)，并伴有相當(dāng)大的結(jié)構(gòu)重排[43]，見圖1.3。與ATP結(jié)合導(dǎo)致N末端結(jié)構(gòu)域的二聚化，形成HSP90“分子鉗”。水解后，ATPase結(jié)構(gòu)域解離，HSP90單體在N端分開，

第1章引言7多種輔助因子調(diào)節(jié)該循環(huán)包括CDC37將某些激酶底物傳遞給HSP90，抑制ATPase活性，而HOP抑制N端二聚化；AHA1刺激ATP水解，而p23在ATP水解之前穩(wěn)定HSP90的二聚形式[44]。圖1.3HSP90分子伴侶的ATP酶循環(huán)系統(tǒng)[44]HSP90占細(xì)胞總蛋白含量的1%，在癌細(xì)胞中的表達(dá)量是正常細(xì)胞的10倍，它是維持癌細(xì)胞中許多重要的客戶蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和活性所必需的[45]。由于癌細(xì)胞依賴于癌蛋白，單個(gè)癌蛋白的失活通常會(huì)導(dǎo)致癌細(xì)胞停止增殖或癌細(xì)胞死亡[46]。突變蛋白的穩(wěn)定性不如正常蛋白，但其穩(wěn)定性依賴于HSP90，與正常細(xì)胞相反，癌細(xì)胞要承受多種壓力，例如低pH，缺氧和營養(yǎng)缺乏等，因此，癌細(xì)胞高度依賴于HSP90分子伴侶機(jī)制的活性[47]。HSP90對于許多參與引發(fā)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常的蛋白穩(wěn)定性和活性是密切相關(guān)的，HSP90常被稱為癌癥伴侶[41]。因此，抑制HSP90伴侶蛋白活性可以有助于癌癥治療。1.2.2靶向HSP90抗腫瘤的藥物近年來，越來越多的HSP90小分子抑制劑被報(bào)道。由于HSP90抑制劑在癌細(xì)胞中比在正常細(xì)胞中更容易與HSP90結(jié)合，以HSP90為靶點(diǎn)的藥物在腫瘤治


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