腫瘤微環(huán)境是指腫瘤發(fā)生及惡性演進(jìn)過程中與宿主相互作用所形成的腫瘤局部環(huán)境,腫瘤微環(huán)境具有特異激活的細(xì)胞信號(hào)通路,例如:NF-κB、STAT3等,并誘導(dǎo)各種促炎性細(xì)胞因子、趨化因子和血管生成因子的表達(dá),促進(jìn)血管生成、腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。腫瘤獨(dú)特的微環(huán)境不僅影響免疫細(xì)胞的功能,而且還會(huì)在腫瘤部位募集更多的炎癥細(xì)胞以增強(qiáng)炎癥作用。二者相互促進(jìn),形成惡性循環(huán)并加速腫瘤的發(fā)展。本研究首先利用腫瘤細(xì)胞無法通過的3μm孔徑大小的Transwell小室構(gòu)建細(xì)胞共培養(yǎng)模型,此共培養(yǎng)模型能夠簡化腫瘤在生物體內(nèi)與周圍細(xì)胞間進(jìn)行能量代謝和物質(zhì)交換的環(huán)境,模擬體內(nèi)腫瘤賴以生存的腫瘤微環(huán)境。之后以該共培養(yǎng)模型為基礎(chǔ)進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn),首先檢測大鼠成骨細(xì)胞與宮頸癌細(xì)胞Si Ha在共培養(yǎng)后大鼠成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化以及增殖速率情況。在共培養(yǎng)后大鼠成骨細(xì)胞與單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)相比細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了間質(zhì)表型改變,并且增殖速率和遷移能力有顯著上升,同時(shí)在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。為了檢測共培養(yǎng)體系細(xì)胞互作對(duì)于腫瘤細(xì)胞表型的影響,本課題檢測了腫瘤細(xì)胞在共培養(yǎng)之后的表型變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞在與大鼠成骨細(xì)胞共培養(yǎng)后,腫瘤細(xì)胞... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-21-第3章腫瘤細(xì)胞與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)兩種細(xì)胞表型的影響已知腫瘤在發(fā)生和發(fā)展的過程中會(huì)通過表觀遺傳學(xué)修飾、代謝重編程等方法改變自身生存的環(huán)境。被腫瘤改造的微環(huán)境會(huì)進(jìn)一步影響其中的組織細(xì)胞、免疫細(xì)胞等，使其能夠促進(jìn)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移。骨組織是多種惡性腫瘤的選擇性靶點(diǎn)，骨轉(zhuǎn)移惡性化程度高、預(yù)后較差。為進(jìn)一步探討腫瘤惡性演進(jìn)過程中，癌細(xì)胞對(duì)環(huán)境細(xì)胞的影響及其機(jī)制，本課題設(shè)計(jì)了腫瘤細(xì)胞與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系，在兩種細(xì)胞共同培養(yǎng)的條件下，通過對(duì)成骨細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的表型觀察及其可能的機(jī)制進(jìn)行探討,進(jìn)而理解腫瘤細(xì)胞惡性演進(jìn)中與環(huán)境細(xì)胞的互作機(jī)制。3.1構(gòu)建腫瘤細(xì)胞與大鼠成骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型為了模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境的情況，需要將腫瘤細(xì)胞與大鼠成骨細(xì)胞共同培養(yǎng)，但是，大鼠成骨細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞在單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)所用的培養(yǎng)基成分略有不同，培養(yǎng)基分別為α-MEM和DMEM培養(yǎng)基。因此，實(shí)驗(yàn)前期需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇同時(shí)滿足兩種細(xì)胞生長所需的最適培養(yǎng)基，在保證兩種細(xì)胞的生長狀態(tài)均良好的情況才能進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過前期預(yù)實(shí)驗(yàn)后，最終選擇含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基作為共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)使用，同時(shí)通過實(shí)驗(yàn)檢測了腫瘤細(xì)胞不會(huì)通過3μm孔徑大小的transwell小室，并最終建立了腫瘤細(xì)胞與大鼠成骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型（圖3-1）。圖3-1：細(xì)胞共培養(yǎng)模型示意圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-23-大鼠成骨細(xì)胞在單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞貼壁良好、形態(tài)飽滿，尤其在48h特征最為明顯（圖3-2a），c））；但是在與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，大鼠成骨細(xì)胞在48h就表現(xiàn)為明顯的長梭形（圖3-2b））；并且這種現(xiàn)象在共同培養(yǎng)72h后更為明顯（圖3-2d））。在顯微鏡下進(jìn)行觀察可以發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞細(xì)胞相比，在與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，大鼠成骨細(xì)胞發(fā)生明顯的形態(tài)改變，由于共培養(yǎng)體系中大鼠成骨細(xì)胞并未與SiHa細(xì)胞有直接接觸，因此推測一定是腫瘤細(xì)胞分泌到培養(yǎng)基中的物質(zhì)在調(diào)控成骨細(xì)胞表型改變過程中起重要作用。而影響成骨細(xì)胞表型的物質(zhì)是什么，通過怎樣的方式影響了大鼠成骨細(xì)胞基因表達(dá)以至于形態(tài)的改變尚需要進(jìn)一步研究。但是，需要注意的是，細(xì)胞形態(tài)向長梭形轉(zhuǎn)變意味著細(xì)胞已經(jīng)出現(xiàn)了轉(zhuǎn)化的趨勢，細(xì)胞的增殖與遷移能力也會(huì)產(chǎn)生變化，因此，有必要對(duì)大鼠成骨細(xì)胞的增殖與遷移表型進(jìn)一步研究以明確腫瘤細(xì)胞對(duì)大鼠成骨細(xì)胞的調(diào)控作用。3.3腫瘤細(xì)胞與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響為了探討在共培養(yǎng)條件下細(xì)胞的增殖狀況，我們采用人工計(jì)數(shù)的辦法，在共培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后，進(jìn)行胰酶消化細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中每個(gè)樣本進(jìn)行三次獨(dú)立計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)，取平均數(shù)利用GraphPad軟件進(jìn)行細(xì)胞增殖曲線的繪制（圖3-3）。OB為單獨(dú)培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞對(duì)照；SiHa-OB為SiHa細(xì)胞與大鼠成骨細(xì)胞共同培養(yǎng)組（n=3，**代表P＜0.01，***代表P＜0.001）圖3-3：共培養(yǎng)體系中腫瘤細(xì)胞對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]炎癥細(xì)胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用及其作為治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展[J]. 馬守寶,林丹丹,劉海燕.  生命科學(xué). 2016(02)
[2]腫瘤微環(huán)境中乳酸對(duì)巨噬細(xì)胞表型極化和功能的影響[J]. 劉妍,陳翀,曹峰琦,白麗鵬,羅云萍.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2014(06)



本文編號(hào)：3091933