第一部分CircZNF609在結直腸癌組織及血清中的表達目的:探究CircZNF609在結直腸癌患者癌組織和血清中的表達是否存在差異。方法:1.將4%多聚甲醛固定的組織進行脫水、包埋、切片,之后進行HE染色;2.提取組織及血清RNA、反轉錄、RT-PCR檢測并驗證CircZNF609在結直腸患者癌組織和血清中的表達水平。結果:首先,針對CircZNF609設計特異性的擴增引物,證實CircZNF609在結直腸組織中存在表達。收集45例結直腸癌患者術后結直腸癌組織及癌旁正常組織標本,檢測CircZNF609在癌組織及癌旁正常組織中表達,結果顯示結直腸癌組織中CircZNF609的表達顯著低于癌旁正常組織（P<0.05）。進一步結合患者臨床病理參數(shù)分析,結果顯示CircZNF609的表達與腫瘤直徑密切相關（P<0.05）,而與患者性別、年齡、腫瘤分化、腫瘤形態(tài)、血管及神經(jīng)浸潤等臨床病理因素無關。此外,患者血清檢測結果表明結直腸癌患者血清中CircZNF609的表達低于健康體檢人群（P<0.05）。結論:cir c ZNF609在結直腸癌癌組織中表達水平下降。CircZNF... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學河北省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

circZNF609在CRC組織中的表達Fig.2TheexpressionofcircZNF609inCRCtissues

17meterwaslargeandtheexpressionlevelofcircZNF609waslow(P＜0.05).4.circZNF609在血清中的表達為了評估circZNF609是否可以作為結直腸癌患者診斷的潛在生物標志物，分別檢測了46例結直腸癌患者及46例健康體檢人群血清樣本中circZNF609的表達是否存在差異。RT-PCR結果表明結直腸癌患者血清中circZNF609的表達低于健康體檢人群（見圖4A，P<0.05）。為進一步評價circZNF609作為血清診斷標志物的診斷價值，建立了受試者工作特征曲線（ROC，見圖4B），其靈敏度為0.65，特異度為0.80。曲線下面積（AUC）為0.77（95%CI,0.670-0.86），以上結果提示circZNF609可能成為結直腸癌診斷的潛在生物標志物。圖4circZNF609在血清中的表達Fig.4TheexpressionofcircZNF609inserumFig.4ART-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609inserum.TheresultsshowedthattheexpressionofcircZNF609intheserumofcolorectalcancerpatientswaslowerthanthatofhealthypeople（P＜0.05）.Fig.4BReceiveroperatingcharacteristic(ROC)curveanalysiswasusedtoverifythediagnosticvalueofcircZNF609asaserumbiomarker.Thesensitivityandspecifcitywere0.65and0.80,respectively.Theareaunderthecurve(AUC)was0.77(95%CI,0.67–0.86),andthecutovaluewas6.915.

35結果1.circZNF609在結直腸癌細胞中的表達首先，RT-PCR檢測了三種細胞中circZNF609的表達，結果顯示circZNF609在HCT116和HT29人結腸癌細胞中的表達顯著低于正常結直腸粘膜細胞FHC（P＜0.05，見圖1），且HCT116細胞中降低最為明顯，故選擇HCT116細胞進行后續(xù)細胞功能試驗。圖1circZNF609在細胞中的表達Fig.1TheexpressionofcircZNF609incells.Fig.1RT-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609incells.TheexpressionofcircZNF609inhumancolorectalcancercellsofHCT116andHT29wassignificantlylowerthannormalcolorectalmucosalFHCcell（P＜0.05）.2.circZNF609過表達質(zhì)粒的構建為進一步探究circZNF609的功能，構建circZNF609的過表達載體。首先，設計含有EcoRⅤ和SacⅡ酶切位點的特異性引物擴增ZNF609成環(huán)片段的全長線性序列，瓊脂糖凝膠電泳顯示擴增產(chǎn)物長度正確（全長序列見circBaseID:hsa_circ_0000615,見圖2A）。通過雙酶切位點，將擴增片段插入pcDNA3.1(+)CircRNAMiniVector，構建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-circZNF609。重組質(zhì)粒測序證實插入序列準確無誤，circZNF609過表達載體構建成功。質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒后，使用Lipofectamine2000轉染試劑，轉染HCT116細胞24h，RT-PCR結果顯示circZNF609在HCT116細胞中過表達成功（P＜0.05，見圖2B）。


本文編號：3076621