第一部分CircZNF609在結(jié)直腸癌組織及血清中的表達(dá)目的:探究CircZNF609在結(jié)直腸癌患者癌組織和血清中的表達(dá)是否存在差異。方法:1.將4%多聚甲醛固定的組織進(jìn)行脫水、包埋、切片,之后進(jìn)行HE染色;2.提取組織及血清RNA、反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR檢測并驗證CircZNF609在結(jié)直腸患者癌組織和血清中的表達(dá)水平。結(jié)果:首先,針對CircZNF609設(shè)計特異性的擴(kuò)增引物,證實CircZNF609在結(jié)直腸組織中存在表達(dá)。收集45例結(jié)直腸癌患者術(shù)后結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本,檢測CircZNF609在癌組織及癌旁正常組織中表達(dá),結(jié)果顯示結(jié)直腸癌組織中CircZNF609的表達(dá)顯著低于癌旁正常組織（P<0.05）。進(jìn)一步結(jié)合患者臨床病理參數(shù)分析,結(jié)果顯示CircZNF609的表達(dá)與腫瘤直徑密切相關(guān)（P<0.05）,而與患者性別、年齡、腫瘤分化、腫瘤形態(tài)、血管及神經(jīng)浸潤等臨床病理因素?zé)o關(guān)。此外,患者血清檢測結(jié)果表明結(jié)直腸癌患者血清中CircZNF609的表達(dá)低于健康體檢人群（P<0.05）。結(jié)論:cir c ZNF609在結(jié)直腸癌癌組織中表達(dá)水平下降。CircZNF... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

circZNF609在CRC組織中的表達(dá)Fig.2TheexpressionofcircZNF609inCRCtissues

17meterwaslargeandtheexpressionlevelofcircZNF609waslow(P＜0.05).4.circZNF609在血清中的表達(dá)為了評估circZNF609是否可以作為結(jié)直腸癌患者診斷的潛在生物標(biāo)志物，分別檢測了46例結(jié)直腸癌患者及46例健康體檢人群血清樣本中circZNF609的表達(dá)是否存在差異。RT-PCR結(jié)果表明結(jié)直腸癌患者血清中circZNF609的表達(dá)低于健康體檢人群（見圖4A，P<0.05）。為進(jìn)一步評價circZNF609作為血清診斷標(biāo)志物的診斷價值，建立了受試者工作特征曲線（ROC，見圖4B），其靈敏度為0.65，特異度為0.80。曲線下面積（AUC）為0.77（95%CI,0.670-0.86），以上結(jié)果提示circZNF609可能成為結(jié)直腸癌診斷的潛在生物標(biāo)志物。圖4circZNF609在血清中的表達(dá)Fig.4TheexpressionofcircZNF609inserumFig.4ART-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609inserum.TheresultsshowedthattheexpressionofcircZNF609intheserumofcolorectalcancerpatientswaslowerthanthatofhealthypeople（P＜0.05）.Fig.4BReceiveroperatingcharacteristic(ROC)curveanalysiswasusedtoverifythediagnosticvalueofcircZNF609asaserumbiomarker.Thesensitivityandspecifcitywere0.65and0.80,respectively.Theareaunderthecurve(AUC)was0.77(95%CI,0.67–0.86),andthecutovaluewas6.915.

35結(jié)果1.circZNF609在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)首先，RT-PCR檢測了三種細(xì)胞中circZNF609的表達(dá)，結(jié)果顯示circZNF609在HCT116和HT29人結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)顯著低于正常結(jié)直腸粘膜細(xì)胞FHC（P＜0.05，見圖1），且HCT116細(xì)胞中降低最為明顯，故選擇HCT116細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞功能試驗。圖1circZNF609在細(xì)胞中的表達(dá)Fig.1TheexpressionofcircZNF609incells.Fig.1RT-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609incells.TheexpressionofcircZNF609inhumancolorectalcancercellsofHCT116andHT29wassignificantlylowerthannormalcolorectalmucosalFHCcell（P＜0.05）.2.circZNF609過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建為進(jìn)一步探究circZNF609的功能，構(gòu)建circZNF609的過表達(dá)載體。首先，設(shè)計含有EcoRⅤ和SacⅡ酶切位點的特異性引物擴(kuò)增ZNF609成環(huán)片段的全長線性序列，瓊脂糖凝膠電泳顯示擴(kuò)增產(chǎn)物長度正確（全長序列見circBaseID:hsa_circ_0000615,見圖2A）。通過雙酶切位點，將擴(kuò)增片段插入pcDNA3.1(+)CircRNAMiniVector，構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-circZNF609。重組質(zhì)粒測序證實插入序列準(zhǔn)確無誤，circZNF609過表達(dá)載體構(gòu)建成功。質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒后，使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞24h，RT-PCR結(jié)果顯示circZNF609在HCT116細(xì)胞中過表達(dá)成功（P＜0.05，見圖2B）。


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