目的:研究SALL4（spalt-like transcription factor 4,婆羅雙樹樣基因4）在胃癌細(xì)胞糖酵解中的作用,探討SALL4通過(guò)調(diào)控HK-2（hexokinase II,己糖激酶II）的表達(dá)影響胃癌細(xì)胞糖酵解水平從而促進(jìn)其惡性進(jìn)展的具體機(jī)制,為揭示SALL4與胃癌細(xì)胞糖酵解、胃癌惡性進(jìn)展關(guān)系提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為胃癌分子診斷、診療、臨床預(yù)后評(píng)估提供新的思路和靶點(diǎn)。方法:根據(jù)SALL4表達(dá)情況選取兩對(duì)胃癌細(xì)胞株MGC-803、SGC-7901和HGC-27、AGS分別進(jìn)行SALL4敲減和過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)。利用葡萄糖攝取、乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平和己糖激酶活性分析試劑盒檢測(cè)胃癌細(xì)胞的糖酵解水平。采用qRT-PCR和Western blot檢測(cè)SALL4、糖酵解相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)變化。隨后采用基因芯片技術(shù)初步篩出SALL4的下游靶標(biāo)。再采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證胃癌細(xì)胞中SALL4對(duì)HK-2基因的結(jié)合作用以及利用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SALL4對(duì)HK-2基因的調(diào)控作用。采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)和克隆形成... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SALL4siRNA干擾和質(zhì)粒過(guò)表達(dá)的效率鑒定

SALL4調(diào)控糖酵解促進(jìn)胃癌惡性進(jìn)展作用及機(jī)制223.3.2siRNA干擾SALL4表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞糖酵解的影響在胃癌細(xì)胞MGC-803和SGC-7901中，干擾SALL4表達(dá)后，分別用試劑盒檢測(cè)胃癌細(xì)胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，干擾SALL4后，MGC-803和SGC-7901的葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平均下降，證明了SALL4水平降低后，下調(diào)了胃癌細(xì)胞MGC-803和SGC-7901的糖酵解水平（圖3.2A，B）。AB圖3.2siRNA干擾SALL4表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞糖酵解的影響(A，B)干擾SALL4表達(dá)后，檢測(cè)MGC-803細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平。**P<0.01，***P<0.001。Figure3.2EffectofsiRNAinterferencewithSALL4expressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfterinterferingwiththeexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofMGC-803cellsandSGC-7901cellsweredetected.**P<0.01,***P<0.001.3.3.3SALL4過(guò)表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞糖酵解的影響在胃癌細(xì)胞HGC-27和AGS中，過(guò)表達(dá)SALL4后，分別用試劑盒檢測(cè)胃癌細(xì)胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)SALL4后，HGC-27和AGS的葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文23酶活性、ATP水平均上升，證明了SALL4水平上調(diào)后，增加了胃癌細(xì)胞HGC-27和AGS的糖酵解水平（圖3.3A，B）。AB圖3.3SALL4過(guò)表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞糖酵解的影響(A，B)過(guò)表達(dá)SALL4后，檢測(cè)HGC-27細(xì)胞和AGS細(xì)胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Figure3.3EffectofSALL4overexpressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfteroverexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofHGC-27cellsandAGScellsweredetected.*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001.3.3.4siRNA干擾SALL4對(duì)胃癌細(xì)胞糖酵解相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SALL4能夠影響胃癌細(xì)胞糖酵解水平，KEGG分析基因芯片結(jié)果也顯示了SALL4能夠影響糖酵解通路（圖3.4A），因此我們進(jìn)一步探討在胃癌細(xì)胞中糖酵解相關(guān)基因和蛋白是否能夠被SALL4影響其表達(dá)。用SALL4siRNA干擾MGC-803和SGC-7901細(xì)胞的SALL4的表達(dá)，qRT-PCR檢測(cè)了一些糖酵解相關(guān)的基因的變化。與對(duì)照組相比，在MGC-803細(xì)胞中，si-SALL4組HK-2、LDHA、PGK1（phosphoglyceratekinase1,磷酸甘油酸激酶1）基因均下調(diào)（圖3.4B）；而在SGC-7901細(xì)胞中，si-SALL4組HK-2、LDHA、PGK1、PFKL(6-phosphofructokinase，livertype，6-磷酸果糖激酶，肝型)、GLUT1、PKM2的表達(dá)均發(fā)生了降低（圖3.4C）。Westernblot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，兩種

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3071231