發(fā)布時(shí)間：2021-03-01 22:15

　　目的:初步探索自噬對(duì)Lewis肺癌移植瘤小鼠脾臟中粒細(xì)胞樣髓源性抑制細(xì)胞（granulocytic myeloid derived suppressor cells,G-MDSCs）體外存活能力與抑制性功能分子的影響。方法:Lewis肺癌細(xì)胞系體外培養(yǎng)后,構(gòu)建小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,通過免疫磁珠分選方法獲得脾臟G-MDSCs,與熒光抗體（Ly-6C-FITC/Ly-6GPE/CD11b-PE/CY5）孵育后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)G-MDSCs細(xì)胞純度;瑞吉染色后觀察其形態(tài)特征;采用雷帕霉素和氯喹處理后,通過蛋白質(zhì)印跡法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)志性分子微管相關(guān)蛋白1-輕鏈3Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ,LC3-Ⅱ）蛋白的表達(dá)水平。培養(yǎng)體系中加入雷帕霉素和自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）,7-AAD染色檢測(cè)自噬對(duì)G-MDSCs生存的影響;提取細(xì)胞總蛋白后檢測(cè)胞內(nèi)精氨酸酶的水平。結(jié)果:通過磁珠分選的方法可從小鼠脾臟中獲得純度較高的G-MDSCs,其細(xì)胞核呈環(huán)狀或分葉狀。雷帕霉素處理GM... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,30(06)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

自噬對(duì)G-MDSCs存活的影響

分離純化G-MDSCs細(xì)胞，小鼠體內(nèi)G-MDSCs表型為CD11b+Ly-6G+Ly-6Clow，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光抗體染色標(biāo)記后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)磁珠分選獲得的G-MDSCs純度，結(jié)果顯示G-MDSCs純度達(dá)95%以上(圖1)。2.2 G-MDSCs形態(tài)的鑒定

獲得G-MDSCs之后，采用瑞士吉姆薩染色對(duì)其形態(tài)進(jìn)行鑒定(圖2)。結(jié)果顯示涂片染色良好，細(xì)胞完整，細(xì)胞核呈環(huán)狀或分葉狀，與文獻(xiàn)中所描述的G-MDSCs形態(tài)一致[3]。2.3 雷帕霉素促進(jìn)G-MDSCs自噬


本文編號(hào)：3058108