【研究背景及目的】肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）約占原發(fā)性肝癌的70-90%,具有起病隱匿、發(fā)展迅速、預后差、轉移率高等特點。近年來其治療雖然有了進展,但預后仍不令人滿意。因而,許多研究者開始著眼于干預HCC的發(fā)生。但是,HCC早期發(fā)生的分子機制仍是未知,探索腫瘤起始機制對于發(fā)展早期發(fā)現(xiàn)手段和有效治療措施至關重要。性別決定區(qū)Y框蛋白9（sex-determining region Y box protein 9,SOX9）是SOX家族中重要的轉錄因子,其在胚胎發(fā)育,維持細胞干性及組織穩(wěn)態(tài)中具有重要意義,并在某些組織中被認為是干細胞的標志物。生理條件下,SOX9在肝臟中主要表達于膽管細胞,僅極少量表達于成熟肝細胞中。然而,在慢性肝損傷再生過程中,表達SOX9的肝細胞明顯增多,這些SOX9陽性細胞表現(xiàn)為兼性肝干細胞,參與肝細胞和膽管細胞的再生。既往較多研究發(fā)現(xiàn)SOX9是一種促癌因子,在多種惡性腫瘤中都異常高表達,并與前列腺癌、胰腺癌和皮膚基底細胞癌的發(fā)生密切相關。SOX9在肝癌組織中亦高表達,且與不良預后相關。目前研究表明皮膚、血液、胃腸等多種器官或組... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

Sox9-Flp/Ai65D小鼠基因型鑒定及標記原理

1-3. 不同周齡 Sox9-Flp/Ai65D 正常小鼠肝臟中 TdTom 表達量的情況。（A）齡的 Sox9-Flp/Ai65D 正常未造模小鼠肝臟中 TdTom 陽性的細胞數(shù)量保持相。Scale bar=200μm。（B）不同周齡的 Sox9-Flp/Ai65D 小鼠肝臟中 TdTom 陽比率的量化統(tǒng)計圖。紅色熒光用 image protein-plus 軟件進行定量（n=3）。

三、肝細胞表達 SOX9 不是發(fā)生肝癌的必要條件該部分研究在小鼠原發(fā)性肝癌模型中，觀察了肝癌細胞是否來自曾經(jīng)表達過SOX9 的肝細胞。利用 AAV8-TBG-Cre 標記 Sox9-Flp/Ai65D 小鼠肝細胞，再以STZ-HFD 和 DEN×1 次兩種方式誘導小鼠發(fā)生原發(fā)性肝癌。待腫瘤形成后處死小鼠并分析肝細胞及腫瘤細胞表達 TdTom 的情況，進而了解肝癌細胞是否來源于表達過SOX9 的肝細胞。1、STZ-HFD 模型同種肝癌模型造模相同時間，與非示蹤小鼠相比（圖 1-4A），Sox9-Flp/Ai65D示蹤小鼠肝臟呈淡紅色，肝臟形態(tài)飽滿，質軟，表面可見紅色（細胞表達紅色熒光蛋白 TdTom 導致）或白色的小結節(jié)（圖 1-4B）。進一步行免疫熒光檢測，可見腫瘤組織 Ki67 表達較癌旁組織明顯增加； TdTom+和 TdTom_的肝癌均存在，且兩種腫瘤可能存在于同一只小鼠的肝臟組織中；癌旁組織中肝細胞大部分被標記為紅色（圖 1-4C）。AB

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Novel insight into mechanisms of cholestatic liver injury[J]. Benjamin L Woolbright,Hartmut Jaeschke.  World Journal of Gastroenterology. 2012(36)



本文編號：3055592