發(fā)布時(shí)間：2021-02-23 16:41

　　CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)是基于細(xì)菌和古細(xì)菌抵御外源核酸入侵的免疫機(jī)制為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)出來(lái)的一種新型的基因編輯技術(shù),通過(guò)RNA介導(dǎo),特異性地切割外源遺傳物質(zhì)來(lái)對(duì)抗入侵的病毒和質(zhì)粒。其具有靶向性強(qiáng)、剪切效率高的特點(diǎn),在高效、多位點(diǎn)的基因組定點(diǎn)修飾方面更加具有優(yōu)勢(shì)。目前,CRISPR/Cas9技術(shù)在基因的功能研究、基因治療、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等研究領(lǐng)域具有廣闊前景。SETand MYND domain-containing protein 3 （SMYD3）是一種組蛋白H3-K4甲基化酶,存在于多種惡性腫瘤如肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、乳腺癌及膽管癌中,在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用。SMYD3可通過(guò)與其下游基因的啟動(dòng)子區(qū)特異位點(diǎn)的結(jié)合,改變?nèi)旧w組蛋白甲基化的修飾狀態(tài)來(lái)調(diào)控基因表達(dá),從而對(duì)細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡等產(chǎn)生影響,但其調(diào)節(jié)機(jī)制還有待明確。本研究檢測(cè)了SMYD3 mRNA在人肺癌細(xì)胞系中的表達(dá),并利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除SMYD3基因后研究其對(duì)肺癌細(xì)胞惡性表型的影響。利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了在人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460中SMYD3 mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果表明,H460肺癌細(xì)胞系SMY... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 綜述部分
    第一章 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)
        引言
        1.1 CRISPR/Cas的定義與作用機(jī)理
        1.2 CRISPR/Cas9技術(shù)的應(yīng)用
        1.3 CRISPR/Cas9技術(shù)脫靶作用的研究
        1.4 CRISPR/Cas9技術(shù)與其他基因編輯技術(shù)的比較
        1.5 結(jié)語(yǔ)與展望
        參考文獻(xiàn)
    第二章 SMYD3在腫瘤中的研究進(jìn)展
        引言
        2.1 SMYD3的結(jié)構(gòu)與功能
        2.2 SMYD3與下游基因的關(guān)系
        2.3 SMYD3與腫瘤之間的關(guān)系
        2.4 展望
        參考文獻(xiàn)
第二部分 實(shí)驗(yàn)部分
    第一章 CRISPR/Cas載體的構(gòu)建及檢測(cè)
        引言
        材料與方法
            1 實(shí)驗(yàn)材料
            2 實(shí)驗(yàn)方法
        實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1 測(cè)序分析
            2 載體構(gòu)建
            3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            4 SMYD3的PCR引物的驗(yàn)證
            5 SMYD3基因敲除的鑒定
            6 測(cè)序鑒定
        討論
    第二章 CRISPR/Cas9載體敲除SMYD3基因后對(duì)人肺癌細(xì)胞A549和H460的影響
        引言
        材料與方法
        結(jié)果
            1 基因敲除前后不同細(xì)胞系中SMYD3表達(dá)水平比較
            2 敲除SMYD3基因后對(duì)細(xì)胞特性的影響
        討論
        參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)在癌癥研究中的應(yīng)用[J]. 王大勇,馬寧,惠洋,高旭.  遺傳. 2016(01)
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博士論文
[1]重編程的CRISPR-Cas9對(duì)HPV6/11 E7基因轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其機(jī)制研究[D]. 劉宇辰.安徽醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]利用CRISPR/Cas9進(jìn)行基因編輯[D]. 沈彬.南京大學(xué) 2014
[3]ZFNs介導(dǎo)的牛MSTN位點(diǎn)的基因打靶研究[D]. 趙宇航.內(nèi)蒙古大學(xué) 2014

碩士論文
[1]利用鋅指核酶技術(shù)制備MSTN基因敲除的牛胎兒成纖維細(xì)胞[D]. 云亭.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3047901