背景和目的:肺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一,死亡率無論在中國還是世界范圍內(nèi)均排惡性腫瘤的第一位,且仍呈上升趨勢。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,大多會(huì)表現(xiàn)一系列共有的特征,包括:持續(xù)性的增值信號(hào)、逃逸生長抑制因子、抵抗細(xì)胞死亡及永生化、激活侵襲轉(zhuǎn)移和促進(jìn)血管生成。針對(duì)腫瘤的血管生成,目前已經(jīng)開發(fā)有針對(duì)VEGF及其受體的單克隆抗體還有帕唑帕尼等受體酪氨酸激酶抑制劑等。臨床前研究確認(rèn)帕唑帕尼等酪氨酸酶抑制劑具有明確的抑制腫瘤增殖、內(nèi)皮細(xì)胞成管和抑制移植瘤增殖的作用,但臨床研究發(fā)現(xiàn)其總體生存期等指標(biāo)較對(duì)照組提升不明顯,尚需對(duì)帕唑帕尼等抑制劑的作用機(jī)制和細(xì)胞耐受反應(yīng)進(jìn)行深入的研究。方法:（1）本研究選擇多種非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460、L9981和YTMLC-90作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。（2）應(yīng)用MTT法探究帕唑帕尼對(duì)個(gè)細(xì)胞株合適的干預(yù)劑量范圍和時(shí)間。（3）利用流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell侵襲實(shí)驗(yàn)探究帕唑帕尼對(duì)肺癌細(xì)胞周期分布、遷移及侵襲能力的影響。（4）提取10μM帕唑帕尼干預(yù)組和溶劑對(duì)照組帕唑帕尼的總RNA進(jìn)行表達(dá)譜和miRNA譜的芯片檢測,篩選出各細(xì)胞株之間變化趨勢相同的差異表達(dá)... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略語/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、帕唑帕尼對(duì)肺癌增殖和轉(zhuǎn)移能力的體外研究
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞株
        1.1.2 主要試劑和材料
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 試劑配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 MTT檢測帕唑帕尼對(duì)A549,H460,L9981和YTMLC-90的抑制作用。
        1.2.3 細(xì)胞生長曲線的測定
        1.2.4 細(xì)胞周期的測定
        1.2.5 細(xì)胞遷移能力檢測
        1.2.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 A549、H460、L9981和YTMLC-90生長曲線和倍增時(shí)間
        1.3.2 藥物抑制率
        1.3.3 pazopanib對(duì)周期的影響
        1.3.4 pazopanib對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響
        1.3.5 pazopanib對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響
    1.4 討論
        1.4.1 帕唑帕尼的理化性質(zhì)
        1.4.2 帕唑帕尼對(duì)各細(xì)胞株存活率的抑制實(shí)驗(yàn)
        1.4.3 帕唑帕尼對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響
        1.4.4 帕唑帕尼對(duì)侵襲能力的影響
        1.4.5 帕唑帕尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌周期的影響
    1.5 小結(jié)
二、帕唑帕尼作用于多種非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)譜和miRNA譜改變的檢測和驗(yàn)證
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要試劑盒材料
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞收集和總RNA制備
        2.2.2 RNA定量和質(zhì)檢
        2.2.3 芯片雜交
        2.2.4 芯片洗滌
        2.2.5 芯片掃描及數(shù)據(jù)采集
        2.2.6 芯片數(shù)據(jù)處理和分析
        2.2.7 實(shí)時(shí)定量引物設(shè)計(jì)
        2.2.8 RealtimePCR
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 用于miRNA芯片的RNA質(zhì)檢
        2.3.2 miRNA芯片結(jié)果
        2.3.3 差異表達(dá)miRNA-mRNA關(guān)系及網(wǎng)絡(luò)圖
        2.3.4 差異表達(dá)基因的realtimePCR驗(yàn)證
        2.3.5 差異表達(dá)miRNA的realtimePCR驗(yàn)證
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
三、糖代謝相關(guān)基因PCK2的驗(yàn)證和功能的初步研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑和材料
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 試劑配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 PCK2過表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 RNAoligo序列和訂購
        3.2.3 質(zhì)粒及oligo轉(zhuǎn)染
        3.2.4 RealtimePCR檢測PCK2siRNAs干擾效率
        3.2.5 WesternBlot檢測PCK2過表達(dá)載體及PCK2siRNAs在蛋白水平對(duì)PCK2表達(dá)的影響
        3.2.6 轉(zhuǎn)染PCK2siRNAs及過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.2.7 PCK2基因?qū)?xì)胞周期水平的影響
        3.2.8 PCK2基因?qū)Φ吞歉呷樗岘h(huán)境下細(xì)胞葡萄糖消耗及乳酸生成水平的影響
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 realtimePCR驗(yàn)證PCK2siRNA干擾效果,探究miR-1233-5p、miR-1307-5p與其的關(guān)系
        3.3.2 WesternBlot檢測帕唑帕尼對(duì)PCK2的誘導(dǎo)作用,及驗(yàn)證PCK2-pEGFP過表達(dá)效果
        3.3.3 轉(zhuǎn)染PCK2siRNAs及過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)周期的影響。
        3.3.4 轉(zhuǎn)染PCK2siRNAs或帕唑帕尼干預(yù)對(duì)A549在條件培養(yǎng)環(huán)境下葡萄糖的消耗和乳酸生成的影響
        3.3.5 轉(zhuǎn)染PCK2siRNAs及過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.3.6 轉(zhuǎn)染PCK2過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)帕唑帕尼藥物抑制率的影響
    3.4 討論
        3.4.1 改變PCK2表達(dá)水平對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中乳酸和葡萄糖的影響
        3.4.2 改變PCK2表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響
        3.4.3 改變PCK2表達(dá)水平對(duì)帕唑帕尼對(duì)A549抑制能力的影響
    3.5 小結(jié)
四、PTEN對(duì)多種抗腫瘤藥物的單藥和聯(lián)合作用的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 主要試劑和材料
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 主要試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 接種細(xì)胞
        4.2.2 稀釋藥物
        4.2.3 加5mg/mlMTT溶液并酶標(biāo)儀上機(jī)檢測
        4.2.4 計(jì)算細(xì)胞抑制率和聯(lián)合干預(yù)的相關(guān)參數(shù)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 單藥作用48小時(shí)對(duì)成組細(xì)胞株：MEFWT、MEFPTEN-/-,HCT116WT、HCTPTENKO35細(xì)胞的抑制作用
        4.3.2 雙藥物聯(lián)合對(duì)作用48小時(shí)對(duì)成組細(xì)胞株：MEFWT、MEFPTEN-/-,HCT116WT、HCT116PTENKO35細(xì)胞的抑制作用
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
參考文獻(xiàn)
綜述
    Reference
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MiR-192靶向負(fù)調(diào)控Bim表達(dá)誘導(dǎo)肺癌順鉑耐藥[J]. 張芳,李洋,吳蘅,齊康,尤嘉琮,李雪冰,祖玲玲,潘振華,王玉麗,李永文,李穎,王珉,沈旺,周清華.  中國肺癌雜志. 2014(05)
[2]肺癌細(xì)胞侵襲過程中蛋白分解酶的作用[J]. 沈曉鳴,黃煒,黃濟(jì)群.  廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2001(02)



本文編號(hào)：3033754