多發(fā)性骨髓瘤（MM）是以克隆性漿細(xì)胞異常增殖為特征的惡性腫瘤,也是全球僅次于非霍奇金氏淋巴瘤的第二常見的血液腫瘤。近年來針對MM的臨床治療取得了顯著成效,尤其是幾類新型藥物例如硼替佐米、來那度胺、卡非佐米等的臨床應(yīng)用,極大改善了MM患者的生存率。但是,由于耐藥性的發(fā)生,大多數(shù)MM患者終將因?yàn)閺?fù)發(fā)而死亡。我們利用近年來在B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病臨床試驗(yàn)中獲得成功的嵌合抗原受體基因修飾的T細(xì)胞（CAR-T細(xì)胞）技術(shù),針對MM細(xì)胞高表達(dá)CD138,以及少部分MM細(xì)胞呈現(xiàn)CD138-/CD19+的特點(diǎn),而且基于CD19-CAR-T細(xì)胞已被初步發(fā)現(xiàn)可有效殺傷MM細(xì)胞的臨床試驗(yàn)報道,分別構(gòu)建了靶向CD138和CD19的CAR-NK-92MI細(xì)胞和CAR-T細(xì)胞,以多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系RPMI8226和U266為模型,在體外驗(yàn)證這幾種CAR細(xì)胞的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示無論是CAR-NK-92MI細(xì)胞還是CAR-T細(xì)胞,其細(xì)胞毒性都遠(yuǎn)遠(yuǎn)要高于未做修飾的NK-92MI細(xì)胞和T細(xì)胞。另外通過小鼠實(shí)驗(yàn),證明了聯(lián)合應(yīng)用CAR-CD138-T細(xì)胞和CAR-CD19-T細(xì)胞對MM小鼠模型具有更加顯著的毒性。 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

酶切圖譜膠回收后進(jìn)行酶連，做轉(zhuǎn)化，挑陽性菌落進(jìn)行PCR菌檢，菌檢圖譜如下圖

挑陽性菌落進(jìn)行 PCR 菌檢，菌檢圖譜如下圖1B 所示，DNA marker 為 2000 bp，從結(jié)果來看 CD138-CAR 1-5 條帶和 hCD19-CAR1、2、5 條帶基本相符，滿足后續(xù)測序驗(yàn)證的條件。

圖 2 K562 表面抗原的檢測A. K562-CD138（上圖）和 K562-CD19（下圖）細(xì)胞表面抗原檢測；B. K562 細(xì)胞表面 CD138（上層）和 CD19（下層）抗原檢測。1.3 腫瘤細(xì)胞抗原檢測為了驗(yàn)證 CAR-CD138 細(xì)胞的體外殺傷效果，我們選擇 CD138 陽性的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 8226 和 U266 細(xì)胞作為靶細(xì)胞，由于骨髓瘤細(xì)胞表面 CD19 抗原表達(dá)水平級低，難以使用常規(guī)方法檢測，所以我們暫且選擇兩株 CD19 陽性的套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 MAVER-1 和 JeKo-1 作為靶細(xì)胞，來驗(yàn)證 hCD19-CAR 細(xì)胞的體外毒性。圖 3 是幾種靶細(xì)胞表型檢測情況，8226 和 U266 細(xì)胞表面 CD138 抗原的表達(dá)率分別為 98%和 99%（圖 3A），MAVER-1 和 JeKo-1 表面 CD19 抗原的表達(dá)率分別為 93%和 75%（圖 2B）。


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