多發(fā)性骨髓瘤（MM）是以克隆性漿細胞異常增殖為特征的惡性腫瘤,也是全球僅次于非霍奇金氏淋巴瘤的第二常見的血液腫瘤。近年來針對MM的臨床治療取得了顯著成效,尤其是幾類新型藥物例如硼替佐米、來那度胺、卡非佐米等的臨床應用,極大改善了MM患者的生存率。但是,由于耐藥性的發(fā)生,大多數(shù)MM患者終將因為復發(fā)而死亡。我們利用近年來在B細胞急性淋巴細胞白血病臨床試驗中獲得成功的嵌合抗原受體基因修飾的T細胞（CAR-T細胞）技術,針對MM細胞高表達CD138,以及少部分MM細胞呈現(xiàn)CD138-/CD19+的特點,而且基于CD19-CAR-T細胞已被初步發(fā)現(xiàn)可有效殺傷MM細胞的臨床試驗報道,分別構建了靶向CD138和CD19的CAR-NK-92MI細胞和CAR-T細胞,以多發(fā)性骨髓瘤細胞系RPMI8226和U266為模型,在體外驗證這幾種CAR細胞的細胞毒性,結果顯示無論是CAR-NK-92MI細胞還是CAR-T細胞,其細胞毒性都遠遠要高于未做修飾的NK-92MI細胞和T細胞。另外通過小鼠實驗,證明了聯(lián)合應用CAR-CD138-T細胞和CAR-CD19-T細胞對MM小鼠模型具有更加顯著的毒性。 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

酶切圖譜膠回收后進行酶連，做轉化，挑陽性菌落進行PCR菌檢，菌檢圖譜如下圖

挑陽性菌落進行 PCR 菌檢，菌檢圖譜如下圖1B 所示，DNA marker 為 2000 bp，從結果來看 CD138-CAR 1-5 條帶和 hCD19-CAR1、2、5 條帶基本相符，滿足后續(xù)測序驗證的條件。

圖 2 K562 表面抗原的檢測A. K562-CD138（上圖）和 K562-CD19（下圖）細胞表面抗原檢測；B. K562 細胞表面 CD138（上層）和 CD19（下層）抗原檢測。1.3 腫瘤細胞抗原檢測為了驗證 CAR-CD138 細胞的體外殺傷效果，我們選擇 CD138 陽性的多發(fā)性骨髓瘤細胞系 8226 和 U266 細胞作為靶細胞，由于骨髓瘤細胞表面 CD19 抗原表達水平級低，難以使用常規(guī)方法檢測，所以我們暫且選擇兩株 CD19 陽性的套細胞淋巴瘤細胞系 MAVER-1 和 JeKo-1 作為靶細胞，來驗證 hCD19-CAR 細胞的體外毒性。圖 3 是幾種靶細胞表型檢測情況，8226 和 U266 細胞表面 CD138 抗原的表達率分別為 98%和 99%（圖 3A），MAVER-1 和 JeKo-1 表面 CD19 抗原的表達率分別為 93%和 75%（圖 2B）。


本文編號：3029839