目的:PD-L1是PD-1的配體蛋白,激活PD-1后發(fā)揮負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用。本課題主要研究放療直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)機(jī)制及其表達(dá)升高后對T細(xì)胞影響。在轉(zhuǎn)錄水平及翻譯后水平深入探討放療誘導(dǎo)PD-L1表達(dá)的分子調(diào)節(jié)機(jī)制,尋找調(diào)節(jié)PD-L1的新臨床靶點(diǎn)。方法:1、在不同癌種細(xì)胞系中Western Blot檢測放療誘導(dǎo)PD-L1蛋白表達(dá),選取目的細(xì)胞系,使用化學(xué)裂解法分離細(xì)胞膜、漿及核,WB檢測放療誘導(dǎo)PD-L1表達(dá)亞細(xì)胞水平。放療不同劑量及時間梯度下,WB和免疫熒光法檢測PD-L1蛋白表達(dá)的放療時間及劑量依賴性。qPCR檢測放療后不同時間條件下,PD-L1mRNA表達(dá)。使用放線菌酮阻斷細(xì)胞mRNA翻譯過程后,檢測PD-L1放療前后表達(dá)。2、將PC-3細(xì)胞行小劑量（0.1Gy）放療后與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng),WB及Annexin V-FITC/7-AAD雙染法檢測放療照射PC-3細(xì)胞后共培養(yǎng)的Jurkat細(xì)胞PD-1/SHP-2通路激活及凋亡。使用PD-L1 siRNA預(yù)先敲低PC-3細(xì)胞PD-L1表達(dá)和PD-1抗體阻斷PD-L1/PD-1后再次檢測共培養(yǎng)Jurkat的PD-1/SH... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

不同癌種細(xì)胞系中放療誘導(dǎo)PD-L1的表達(dá)情況

放療誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞系PD-L1表達(dá)的時間依賴性

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、放療直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞 PD-L1 表達(dá)情況A-B. 不同時間梯度 MDA-MB-231 細(xì)胞系中 PD-L1 蛋白表達(dá)（IR=5Gy）。C. 不同時間梯度 MDA-MB-231 細(xì)胞系中 PD-L1 mRNA 表達(dá)（IR=5Gy）。1.2.2.2 放療誘導(dǎo) PD-L1 表達(dá)的劑量依賴性不同放療劑量下 Western Blot 檢測顯示，MDA-MB-231 及 PC-3 細(xì)胞系在0.1Gy 放療照射下，PD-L1 即開始表現(xiàn)升高，可見放療誘導(dǎo) PD-L1 表達(dá)為劑量非依賴型。A B

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]放射治療聯(lián)合阻斷PD-1/PD-L1通路腫瘤免疫治療的新進(jìn)展[J]. 蔡尚,田野,徐波.  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2016 (03)
[2]性別對高、低發(fā)區(qū)食管癌患者生存期的影響[J]. 湯薩,黃佳,董金城,袁果,李燕,張朋,宋昕,趙學(xué)科,范宗民,雷茜琳,王立東.  腫瘤防治研究. 2014(03)
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本文編號：3022887