肝癌是全球第五大致死性癌癥疾病,其發(fā)病率和死亡率已有逐漸上升趨勢。近年來的研究發(fā)現(xiàn)肝臟的慢性炎癥與肝癌的發(fā)生、進展及預后有密切聯(lián)系。病毒、細菌等致病性病原微生物一旦入侵機體,將迅速啟動機體天然免疫應答并觸發(fā)炎癥性反應。天然免疫是抗病原體感染的第一道防御屏障,引發(fā)炎癥和對感染的抵抗,其反應反復持續(xù)會造成慢性炎癥甚至可能引發(fā)癌癥。研究發(fā)現(xiàn)NLRs（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors）家族成員,如NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRP7及NLRP12等,通過調控多種信號通路參與腫瘤尤其是胃腸道腫瘤的發(fā)生發(fā)展。NLRC5（NLR family,CARD domain containing 5）是最新發(fā)現(xiàn)的NOD樣受體（NOD like receptors,NLRs）家族成員之一,參與機體天然免疫應答和抗病原體感染,可能在短期內誘發(fā)急性炎癥反應或抗炎反應,而長期作用引發(fā)免疫調控功能失衡,可能與癌癥的發(fā)生發(fā)展有關。NLRC5可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。研究表明Wnt/β-catenin信號通路激... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數】：90 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 實驗材料
    2.1 儀器與設備
    2.2 藥品與試劑
    2.3 肝臟組織、細胞株、菌株及質粒
3 實驗方法
    3.1 免疫組織化學SP染色
    3.2 人源NLRC5重組質粒的構建
TM 2000試劑瞬時轉染siRNA進入細胞">    3.3 Lipofectamin^TM 2000試劑瞬時轉染siRNA進入細胞
TM 2000試劑瞬時轉染NLRC5重組質粒進入細胞">    3.4 Lipofectamin^TM 2000試劑瞬時轉染NLRC5重組質粒進入細胞
    3.5 q RT-PCR法檢測m RNA表達
    3.6 Western blot法檢測蛋白表達
    3.7 MTT細胞增殖實驗
    3.8 流式細胞儀檢測檢測細胞周期
    3.9 腫瘤細胞劃痕實驗
    3.10 Transwell腫瘤細胞遷移與侵襲實驗
    3.11 數據處理
4. 實驗結果
    4.1 NLRC5在肝臟組織和細胞中的蛋白變化
        4.1.1 人肝組織中NLRC5蛋白表達
        4.1.2 正常肝細胞和肝癌細胞中的NLRC5蛋白表達
    4.2 NLRC5對肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲的影響
        4.2.1 過表達NLRC5對肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響
        4.2.2 沉默NLRC5對肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響
    4.3 NLRC5對Wnt/β-catenin信號通路的影響
        4.3.1 正常肝細胞和肝癌細胞中Wnt/β-catenin信號通路表達情況
        4.3.2 過表達NLRC5對 β-catenin mRNA和蛋白表達的影響
        4.3.3 沉默NLRC5對 β-catenin m RNA和蛋白表達的影響
        4.3.4 過表達NLRC5對Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表達的影響
        4.3.5 沉默NLRC5對Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表達的影響
        4.3.6 β-catenin 抑制劑 iCRT3 對 BEL-7402 肝癌細胞增殖的影響
        4.3.7 β-catenin 抑制劑 iCRT3 對肝癌細胞 BEL-7402 遷移能力的影響
        4.3.8 iCRT3對肝癌細胞BEL-7402中 β-catenin、Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表達的影響
5.討論
6.結論
7.參考文獻
附錄
致謝
Functions of NLRC5 in immunity and inflammation
    REFERENCES



本文編號：3018587