發(fā)布時(shí)間：2021-01-30 23:18

　　目的:長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lnc RNA）在結(jié)直腸癌（CRC）中的作用尚未完全闡明。本研究旨在初步鑒定lnc RNA-KAT7在CRC細(xì)胞增殖、遷移中的作用及潛在機(jī)制。方法:收集2014-2017年期間郴州市第一人民醫(yī)院140例診斷為結(jié)直腸癌的癌組織及匹配的正常或良性組織樣本。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)lnc RNA-KAT7在CRC組織、細(xì)胞系中的表達(dá),通過(guò)卡方檢驗(yàn)分析其表達(dá)與CRC患者年齡、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的相關(guān)性。利用pc DNA3.1空載體構(gòu)建了lnc RNA-KAT7的表達(dá)載體pc DNA-lnc RNA-KAT7。用Lip2000脂質(zhì)體將lnc RNA-KAT7重組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染相對(duì)低表達(dá)lnc RNA-KAT7的CRC細(xì)胞株,使用新霉素篩選,建立穩(wěn)定表達(dá)lnc RNA-KAT7的單克隆細(xì)胞株。然后進(jìn)行細(xì)胞CCK-8實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、EDU增殖實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、裸鼠皮下注射成瘤實(shí)驗(yàn)以及蛋白免疫印跡法等體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)以評(píng)估其在CRC中的生物學(xué)作用和潛在的分子機(jī)制。結(jié)果:lnc RNA-KAT7在CRC組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁正�；蛄夹阅c... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

空載體pcDNA-3.1+

第3章 結(jié) 果3.1 lncRNA-KAT7 基因的基本信息如上所述，我們先前使用“Agilent 全人類基因組寡核苷酸微陣列（4×44K）”按照標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行 lncRNA 表達(dá)譜芯片分析(結(jié)果未發(fā)表)，在差異表達(dá)的 lncRNA轉(zhuǎn)錄物中篩選出一種長(zhǎng)鏈非編碼 RNA KAT7。LncRNA-KAT7 位于人類 17 號(hào)染色體 hg19 區(qū)域正鏈上，轉(zhuǎn)錄本全長(zhǎng) 575 堿基。生物信息軟件預(yù)測(cè)其沒(méi)有開(kāi)放閱讀框（Open Reading Frame, ORF）,PhyloSCF 得分為-342，提示 lncRNA-KAT7無(wú)蛋白編碼能力。GC 含量 58%，無(wú) 5'端帽子結(jié)構(gòu)和 3'端多聚腺苷酸尾巴（如圖3.1）。

的預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示 lncRNA-KAT7 在 CRC 腫瘤組織中的表達(dá)下調(diào)。為了驗(yàn)證果，我們使用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了 140 對(duì)配對(duì)的 CRC 癌組織與組織中 lncRNA-KAT7 的表達(dá)水平，GAPDH 作為內(nèi)部參照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯ncRNA-KAT7 的表達(dá)水平在 71.4％（100/140）的 CRC 組織中與匹配的正織相比明顯下調(diào)（P <0.05）（如圖 3.2 A）。lncRNA-KAT7 在 CRC 細(xì)胞表達(dá)也低于正常腸上皮細(xì)胞 CCD-18co（如圖 3.2 B），與組織學(xué)結(jié)果相符。們?cè)u(píng)估了 lncRNA-KAT7 表達(dá)水平是否與 CRC 患者的臨床病理參數(shù)相關(guān)。 140 例 CRC 患者分為 lncRNA-KAT7 高表達(dá)組（n = 70）和低表達(dá)組（n =如表 1 所示，CRC 中 lncRNA-KAT7 的表達(dá)水平與腫瘤分化（p = 0.034），轉(zhuǎn)移（p = 0.042），腫瘤大�。╬ = 0.011），腫瘤部位（p = 0.027）密切以上數(shù)據(jù)表明 lncRNA-KAT7 在 CRC 的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。A


本文編號(hào)：3009761