目的建立結(jié)腸癌細(xì)胞紫杉醇耐藥細(xì)胞株LoVo/Taxol,探討結(jié)腸癌細(xì)胞對紫杉醇獲得性耐藥可能的分子機(jī)制并為耐藥逆轉(zhuǎn)研究提供良好的實驗材料。方法以人結(jié)腸癌細(xì)胞株LoVo為親本細(xì)胞,采用紫杉醇（Taxol）濃度梯度遞增法誘導(dǎo)建立結(jié)腸癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株LoVo/Taxol。使用光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);cck-8法檢測細(xì)胞對紫杉醇、阿霉素、5-氟脲嘧啶的藥物敏感性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡水平;實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）分別檢測多藥耐藥相關(guān)基因以及凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯情況。結(jié)果（1）建立的紫杉醇耐藥細(xì)胞株LoVo/Taxol對紫杉醇具有顯著耐藥性,對阿霉素（DOX）及5-氟脲嘧啶（5-FU）也產(chǎn)生強烈的耐藥性。（2）可以觀察到細(xì)胞形態(tài)與超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生了明顯的變化,耐藥細(xì)胞間的黏連明顯少于親本細(xì)胞,且細(xì)胞核質(zhì)比略有變小,線粒體明顯增多。（3）流式細(xì)胞儀測定的周期結(jié)果顯示LoVo/Taxol細(xì)胞G2/M阻滯明顯低于LoVo（p<0.05）,凋亡結(jié)果顯示其凋亡率也顯著低于親本細(xì)胞株（p<0.05）。（4）通過... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

光學(xué)顯微鏡觀察LoVo和LoVo-Taxol細(xì)胞形態(tài)（x200）

圖 5 透射電子顯微鏡觀察 LoVo、LoVo-Taxol 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)注：圖 5A 和 5B（x1000）; 圖 5C 和 5D（x3000）透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)親本細(xì)胞 LoVo 胞漿少，細(xì)胞核大，胞漿內(nèi)可見散在游離核糖，細(xì)胞表面布滿不規(guī)則的微絨毛，細(xì)胞之間可以看到互相黏連（圖 5A，5C）；而耐細(xì)胞 LoVo/Taxol 則胞核變小，核漿比例減小，胞漿內(nèi)空泡結(jié)構(gòu)明顯增多，游離核糖體集且數(shù)量增多，線粒體數(shù)量增多，細(xì)胞表面可見大量的小球狀隆起（圖 5B，5D）。細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示 LoVo 細(xì)胞經(jīng)過 Taxol 長期作用后已發(fā)生穩(wěn)定的變化，經(jīng)過一時間的脫藥培養(yǎng)后，細(xì)胞形態(tài)并沒有恢復(fù)親本的趨勢，是可以穩(wěn)定遺傳的。

圖 6 LoVo 和 LoVo-Taxol 細(xì)胞生長曲線圖注：*P<0.05， **P<0.01 和 ***P<0.001經(jīng)過六天連續(xù)測定親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞生長曲線發(fā)現(xiàn)，它們的生長曲線形態(tài) LoVo細(xì)胞相比，LoVo-Taxol 0.7 和 LoVo-Taxol 1.5 在前三天細(xì)胞增殖速度無明顯在第 4 和第 5 天，增殖速度明顯加快（P＜0.05）,第 6 天又趨于一致（圖 6）。oVo-Taxol 0.7 和 LoVo-Taxol 1.5 細(xì)胞的倍增時間分別為 25.92h、25.32h 和 22.22細(xì)胞倍增時間的減少表明細(xì)胞耐藥后細(xì)胞的增殖未收到抑制，相反有所增強。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生物合成紫杉醇的研究進(jìn)展[J]. 彭濤,林軍,胡海峰,朱寶泉.  世界臨床藥物. 2015(03)



本文編號：2994973