作為非編碼小RNA分子,microRNA能夠通過對靶基因的直接影響從而調(diào)控腫瘤進(jìn)程,其在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的功能和作用越來越受到人們的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)室前期通過chemotaxis模型篩選,得到了運(yùn)動能力存在顯著差異的4種食管癌細(xì)胞亞型,即30-U/D和180-U/D。對它們進(jìn)行nicroRNA芯片分析后,我們發(fā)現(xiàn)miR-17和miR-20a在運(yùn)動能力較弱的“U”細(xì)胞亞群中高表達(dá),提示二者可能與食管癌的運(yùn)動相關(guān)。miR-17/20a屬于miR-17-92癌基因簇,許多研究報(bào)道了二者在多種類型腫瘤進(jìn)展中的作用,但在食管癌中卻鮮有報(bào)道。本研究旨在探究miR-17/20a在食管癌中的功能及調(diào)控機(jī)制。首先,我們利用RT-qPCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了microRNA芯片結(jié)果驗(yàn)證。與30-D和180-D相比,miR-17/20a在30-U和180-U中的表達(dá)較高。通過后續(xù)的體外功能實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)miR-17/20a能夠顯著抑制食管癌細(xì)胞的運(yùn)動和浸潤能力,對細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的作用則比較微弱。通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測,我們得到了多個(gè)miR-17/20a的潛在下游靶基因。Luciferase reporter, Western ... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３．采用反向ＰＣＲ法突變恃定ＤＮＡ序巧Ｉ的原理圖

在３０－Ｄ細(xì)胞中共轉(zhuǎn)ｍｉＲ－１７／２０ａ－５ｐ?ｍｉｍｉｃ和各候選基因的??３’ＵＴ民野生型作用序列后，ＲＡＢ２２Ａ、ＩＴＧＢ８、ＴＧＦＢＲ２、ＰＴＨＬＨ?和?ＺＦＹＶＥ９??實(shí)驗(yàn)紐相比于對照組的山ｃｉｆｅｒａｓｅ酶活性均呈現(xiàn)出有效的下降趨勢（圖１－７）。??在有效的實(shí)驗(yàn)組中，ＴＧＦＢＲ２和ＺＦＹＶＥ９?（亦稱作ＳＡＲＡ，?Ｓｍａｄ?Ａｎ濁ｏｒ?ｆｏｒ??民ｅｃｅｐｔｏｒ?Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，么后Ｗ?ＳＡＲＡ替代）實(shí)驗(yàn)組的下降效果較顯著，且均??參與到ＴＧＦ－Ｐ通路之中。已有研究表明ＴＧＦＢ民２可憐酸化ＴＧＦＢＲ１從而起??始ＴＧＦ－Ｐ通路，在多種腫瘤中受到許多ｍｉｃｒｏ民ＮＡ的調(diào)控，其中就包括ｍｉＲ－??１７和ｍｉＲ－２０ａ，但在食管癌中并未見相關(guān)研究；有關(guān)ＳＡＲＡ分子的研究目前??還較少，發(fā)現(xiàn)其可發(fā)揮支架蛋白的作用使得Ｓｍａｄ２＾能夠被ＴＧＦＢＲ１憐酸??化，從而激活Ｔ畑－Ｐ下游通路。研究表明，ＴＧＦ－Ｐ通路可Ｗ影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)??換化ＭＴ）?Ｗ及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力

２－２．實(shí)驗(yàn)中所使用質(zhì)險(xiǎn)ｐＳｍ圖譜。我們設(shè)計(jì)了若干條ＩＴＧＡＶｓｈＲＮＡ序列，然后將其構(gòu)??到ｐＳ出載體上。??ｍ－?ｍｍｃｎｔｏｒｅｒｍｏ?ｅｒ。??


本文編號：2973983