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1.miR-17/20a調(diào)控TGF-β通路抑制食管癌浸潤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究 2.miR-92b調(diào)控ITGAV抑制食管癌浸潤轉(zhuǎn)

發(fā)布時(shí)間:2021-01-13 02:00
  作為非編碼小RNA分子,microRNA能夠通過對靶基因的直接影響從而調(diào)控腫瘤進(jìn)程,其在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的功能和作用越來越受到人們的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)室前期通過chemotaxis模型篩選,得到了運(yùn)動能力存在顯著差異的4種食管癌細(xì)胞亞型,即30-U/D和180-U/D。對它們進(jìn)行nicroRNA芯片分析后,我們發(fā)現(xiàn)miR-17和miR-20a在運(yùn)動能力較弱的“U”細(xì)胞亞群中高表達(dá),提示二者可能與食管癌的運(yùn)動相關(guān)。miR-17/20a屬于miR-17-92癌基因簇,許多研究報(bào)道了二者在多種類型腫瘤進(jìn)展中的作用,但在食管癌中卻鮮有報(bào)道。本研究旨在探究miR-17/20a在食管癌中的功能及調(diào)控機(jī)制。首先,我們利用RT-qPCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了microRNA芯片結(jié)果驗(yàn)證。與30-D和180-D相比,miR-17/20a在30-U和180-U中的表達(dá)較高。通過后續(xù)的體外功能實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)miR-17/20a能夠顯著抑制食管癌細(xì)胞的運(yùn)動和浸潤能力,對細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的作用則比較微弱。通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測,我們得到了多個(gè)miR-17/20a的潛在下游靶基因。Luciferase reporter, Western ... 

【文章來源】:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】:137 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

1.miR-17/20a調(diào)控TGF-β通路抑制食管癌浸潤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究 2.miR-92b調(diào)控ITGAV抑制食管癌浸潤轉(zhuǎn)


圖1-3.采用反向PCR法突變恃定DNA序巧I的原理圖

序列,初步驗(yàn)證,基因


在30-D細(xì)胞中共轉(zhuǎn)miR-17/20a-5p?mimic和各候選基因的??3’UT民野生型作用序列后,RAB22A、ITGB8、TGFBR2、PTHLH?和?ZFYVE9??實(shí)驗(yàn)紐相比于對照組的山ciferase酶活性均呈現(xiàn)出有效的下降趨勢(圖1-7)。??在有效的實(shí)驗(yàn)組中,TGFBR2和ZFYVE9?(亦稱作SARA,?Smad?An濁or?for??民eceptor?Activation,么后W?SARA替代)實(shí)驗(yàn)組的下降效果較顯著,且均??參與到TGF-P通路之中。已有研究表明TGFB民2可憐酸化TGFBR1從而起??始TGF-P通路,在多種腫瘤中受到許多micro民NA的調(diào)控,其中就包括miR-??17和miR-20a,但在食管癌中并未見相關(guān)研究;有關(guān)SARA分子的研究目前??還較少,發(fā)現(xiàn)其可發(fā)揮支架蛋白的作用使得Smad2^能夠被TGFBR1憐酸??化,從而激活T畑-P下游通路。研究表明,TGF-P通路可W影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)??換化MT)?W及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力

序列,圖譜,載體,序列


2-2.實(shí)驗(yàn)中所使用質(zhì)險(xiǎn)pSm圖譜。我們設(shè)計(jì)了若干條ITGAVshRNA序列,然后將其構(gòu)??到pS出載體上。??m-?mmcntorermo?er。??


本文編號:2973983

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