目的多發(fā)性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）是惡性漿細(xì)胞增殖性疾病,自噬調(diào)控與MM發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),而AKT/mTOR通路是自噬調(diào)控的重要通路。核蛋白1（Nuclearprotein 1,NUPR1）作為一種多功能小分子蛋白,可參與不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞周期、凋亡和自噬等,進(jìn)而影響腫瘤的生存和進(jìn)展。本研究將探討沉默NUPR1對人多發(fā)性骨髓瘤U266和RPMI8226細(xì)胞自噬的影響及可能機(jī)制,旨為MM防治研究開拓新思路。方法①以正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞為對照,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）檢測人多發(fā)性骨髓瘤 U266 和RPMI8226 細(xì)胞 NUPR1 和自噬相關(guān)基因（ATG5、Beclin1）mRNA 水平;②構(gòu)建靶向抑制NUPR1基因表達(dá)的shRNA并包裝慢病毒載體,轉(zhuǎn)染人多發(fā)性骨髓瘤U266和RPMI8226細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)分為未轉(zhuǎn)染組、陰性對照組和干擾組。③透射電子顯微鏡（TEM）觀察自噬小體。④Western Blot檢測NUPR1干擾效果、自噬相關(guān)指標(biāo)（ATG5、Beclin1、P62、LC... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞及人骨髓瘤細(xì)胞ＮＵＰＲｌ、Ｂｅｃｌｉｎｌ及ＡＴＧ５?ｍＲＮＡ相對表達(dá)量??

２．２?ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ?慢病毒轉(zhuǎn)染?Ｕ２６６?和?ＲＰＭＩ８２２６?細(xì)胞??ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ慢病毒轉(zhuǎn)染Ｕ２６６和ＲＰＭＩ８２２６細(xì)胞后，細(xì)胞熒光表達(dá)較強(qiáng)，??流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染效率可達(dá)９０％。（圖２）??１３??

ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ慢病毒轉(zhuǎn)染Ｕ２６６和ＲＰＭＩ８２２６細(xì)胞后，透射電鏡下觀察自噬??小體（白色箭頭所指）明顯少于未轉(zhuǎn)染組和陰性對照組。而未轉(zhuǎn)染組與陰性對照??組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（圖４）??１５??


本文編號：2966028