研究背景及目的原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,在全世界范圍內(nèi)腫瘤致死率中排名第二。據(jù)統(tǒng)計,我國每年死于原發(fā)性肝癌的人數(shù)占全球原發(fā)性肝癌死亡人數(shù)的50%以上,嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。肝癌的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多種病因、多個因素在多階段參與其形成的復(fù)雜的過程。抑癌基因的突變或缺失、原癌基因的激活、細(xì)胞周期調(diào)控異常以及DNA修復(fù)相關(guān)基因的異常表達等某一環(huán)節(jié)出現(xiàn)修復(fù)異常可能就是正常肝細(xì)胞發(fā)生癌變的臨界點,有可能成為肝細(xì)胞出現(xiàn)癌變的標(biāo)志。因此,腫瘤細(xì)胞中DNA的損傷修復(fù)機制是治療腫瘤的一項有有希望的途徑。p53結(jié)合蛋白1（P53 binding protein 1,53BP1）是一種參與DNA損傷修復(fù)的重要傳感器,在保持基因組穩(wěn)定性和預(yù)防癌癥的發(fā)生方面起重要作用。53BP1基因定位于人類染色體15q15-21,有11.Okb和6.6kb兩種轉(zhuǎn)錄本,該基因編碼的蛋白質(zhì)由1972個氨基酸殘基組成,與p53的DNA結(jié)合區(qū)結(jié)合,從而促進p53介導(dǎo)的基因的轉(zhuǎn)錄啟動。53BP1生理功能廣泛,它能快速地聚集在DNA雙鏈斷裂部位并形成核聚物,因此,53BP1被認(rèn)為是內(nèi)源性DNA雙鏈損傷的標(biāo)志物分子之一... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．肝癌細(xì)胞ＨｅｐＧ２的細(xì)胞形態(tài)

染入ＨｅｐＧ２細(xì)胞中，為明確慢病毒是否在細(xì)胞中有穩(wěn)定表達，我們接下來進一??步采用ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的實驗方法驗證穩(wěn)定細(xì)胞株ＨｅｐＧ２中５３ＢＰ１??的表達情況。如圖２Ａ所示，與ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ組相比，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ組細(xì)胞??中５３ＢＰ１的表達明顯下調(diào)（Ｐ＜０．０１），結(jié)果表明慢病毒可以下調(diào)ＨｅｐＧ２細(xì)胞??中５３ＢＰ１的ｍＲＮＡ表達達到９０％左右。我們進一步應(yīng)用??細(xì)胞中５３ＢＰ１的蛋白表達水平。如圖１Ｂ所示，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ組的細(xì)胞中５３ＢＰ１??的表達水平明顯低于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ組（Ｐ＜０．０１）。通過以上研究結(jié)果證實，??ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ組的細(xì)胞中５３ＢＰ１的表達被明顯下調(diào)，而對照組ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ??組的細(xì)胞沒有明顯變化。故我們成功構(gòu)建了穩(wěn)定下調(diào)５３ＢＰ１的人肝癌細(xì)胞株??ＨｅｐＧ２。因此，我們選用這兩組穩(wěn)定細(xì)胞株進行接下來的實驗。??３１??

２．３?５３ＢＰ１抑制人肝癌細(xì)胞ＨｅｐＧ２的增殖??為了探討５３ＢＰ１是否影響了人肝癌細(xì)胞ＨｅｐＧ２的增殖能力，我們下調(diào)??５３ＢＰ１表達之后采用ＭＴＳ的方法進行檢測細(xì)胞增殖活性。如圖３所示，穩(wěn)定下??調(diào)５３ＢＰ１表達的ＨｅｐＧ２細(xì)胞在第３－５天增殖能力明顯強于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ。該??３２??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2963977