目的:化療耐藥是胃癌（尤其晚期胃癌）患者治療失敗最常見和最難克服的問題之一,也是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的主要原因。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CLIC1的表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期及侵襲與遷移能力密切相關(guān),CLIC1是胃癌基因治療的一個潛在的靶點(diǎn)。前期實驗發(fā)現(xiàn)CLIC1在胃癌耐藥細(xì)胞SGC-7901/VCR和其分泌的外泌體中高表達(dá)。我們推測CLIC1可能和腫瘤耐藥相關(guān)。因此,本課題通過提取SGC-7901/VCR的外泌體作用于正常胃癌細(xì)胞SGC-7901,檢測其對長春新堿的耐藥情況和CLIC1表達(dá)水平的改變,同時沉默CLIC1基因在SGC-7901/VCR中的表達(dá)來檢測該細(xì)胞對長春新堿的耐藥情況,和外泌體中CLIC1對胃癌耐藥的作用。方法:CCK-8測定SGC-7901和SGC-7901/VCR對長春新堿的耐藥性,qRT-PCR測定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1基因的表達(dá)情況;Western Blot和免疫熒光測定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1蛋白的表達(dá)情況。提取SGC-7901/VCR和SGC-7901的外泌體,在電子顯微鏡下鑒定外泌體的... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A.耐藥細(xì)胞（SGC-7901/VCR）和敏感細(xì)胞（SGC-7901）的CLIC1蛋白表達(dá)；B.耐藥細(xì)胞

胃癌敏感細(xì)胞（SGC-7901）和耐藥細(xì)胞細(xì)胞（SGC-7901/VCR）的 CLIC1 蛋白表達(dá)分析（igure. 4. Analysis of CLIC1 protein expression in gastric cancer-sensitive cells (SGC-7901) andrug-resistant cell lines (SGC-7901/VCR)（200um）2. SGC-7901/VCR 分泌的外泌體量大于 SGC-7901分別提取耐藥細(xì)胞 SGC-7901/VCR 和胃癌細(xì)胞 SGC-7901 細(xì)液，超速離心法得到的外泌體 V-exo 和 7901-exo，BCA 法測定 SG和 SGC-7901/VCR 外泌體蛋白濃度分別為 5.32±0.78 mg/ml 和 2.4mg/ml。 (P＜0.05 圖 5A)。用 Western blot 通過外泌體標(biāo)記蛋白 H（內(nèi)參 GAPDH）來鑒定外泌體（圖 5B）；并用透射電鏡鑒定外泌態(tài)和大�。▓D 5C）。同時 qRT-PCR 結(jié)果顯示 V-exo 中 CLIC1 基因是 7901-exo 的 1.46±0.23 倍（圖 6），和細(xì)胞檢測結(jié)果相一致。

敏感細(xì)胞(SGC-7901)外泌體的鑒定。(A)每 180mL 細(xì)胞上的含量（注:* 與正常組比較 p<0.05）記蛋白 HSP-70 的表達(dá)(內(nèi)參為 GAPDH)。(C)透射電鏡圖像字標(biāo) 2 是 SGC-7901/VCR。drug-resistant (SGC-7901/VCR) exosomes and sensitive cellsd SGC-7901/VCR exosomes per 180 mL of cell supernatantroup); (B) Western blot: SGC-7901/VCR Expression ofosomes (GAPDH as an internal reference). (C) TEM imagenumber 2 is SGC-7901/VCR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Function of chloride intracellular channel 1 in gastric cancer cells[J]. Peng-Fei Ma,Jun-Qiang Chen,Zhen Wang,Jin-Lu Liu,BoPei Li,Department of Gastrointestinal Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(24)
[2]影響5-FU療效的研究進(jìn)展[J]. 韓勇,壽成超.  中國腫瘤臨床. 2010(21)



本文編號：2929089