發(fā)布時間：2020-12-12 00:01

　　【研究背景及目的】多發(fā)性骨髓瘤是一種惡性漿細(xì)胞疾病,目前為血液系統(tǒng)第二大惡性腫瘤。它以血液和尿液中單克隆免疫球蛋白為特征,發(fā)病機(jī)制尚不明確。該疾病至今無法治愈,幾乎全部的多發(fā)性骨髓瘤患者最后都會復(fù)發(fā)�；颊唠m然可獲益于以新型蛋白酶體抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑為代表的靶向藥物,但對靶向藥物的耐藥日益增加,逐漸成為骨髓瘤治療的難題。深入了解多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病機(jī)制,針對引起骨髓瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵通路研發(fā)新型靶向藥物,已經(jīng)成為多發(fā)性骨髓瘤治療的當(dāng)務(wù)之急。SUMO化修飾是一種重要的蛋白翻譯后修飾體系,可調(diào)節(jié)底物蛋白多種生物學(xué)功能。與正常漿細(xì)胞相比,多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中SUMO化修飾程度顯著增加,與多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后不良相關(guān),但具體機(jī)制尚不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),多發(fā)性骨髓瘤中經(jīng)典Wnt/β-catenin通路高度激活,可促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞過度增殖以及對骨髓瘤治療中經(jīng)典靶向藥物硼替佐米產(chǎn)生耐藥。為探尋SUMO化修飾是否通過Wnt/β-catenin通路影響骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特性,我們以骨髓瘤細(xì)胞株NCI-H929和RPMI-8226為研究對象,SUMO-1小干擾RNA為工具,檢測抑制SUMO化修飾對Wnt/β-... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

正常骨髓漿細(xì)胞及原代多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中SUMO表達(dá)水平

隨后,我們體外培養(yǎng)了7個骨髓瘤細(xì)胞株(LP-1,SKO,CZ-1,RPMI-8226,NCI-H929,KM-3和U266)和1個漿細(xì)胞白血病細(xì)胞株ARH-77,,通過western blot的方法檢測發(fā)生SUMO化修飾水平,從中選擇表達(dá)水平較高的骨髓瘤細(xì)胞株(RPMI-8226和NCI-H929)作為進(jìn)一步研究對象(圖1-2)。2、檢測SUMO-1 si RNA對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的干擾效率

首先采用帶有Cy3熒光標(biāo)記的陰性對照si RNA轉(zhuǎn)染多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞NCI-H929,選取3個不同的si RNA濃度30n M,50n M,100n M。24小時后在熒光顯微鏡下觀察。標(biāo)記有紅色熒光的骨髓瘤細(xì)胞被認(rèn)為轉(zhuǎn)染成功,50n M濃度時轉(zhuǎn)染效率超過90%,在100n M濃度時轉(zhuǎn)染效率最高,且細(xì)胞狀態(tài)正常(圖1-3)。后續(xù)試驗中選用100n M為常規(guī)si RNA使用濃度。通過Real-time PCR方法檢測SUMO-1基因的m RNA表達(dá)水平,以轉(zhuǎn)染陰性對照si RNA組為對照,比較各組SUMO-1基因m RNA水平變化。其中第三組干擾序列對SUMO-1 m RNA表達(dá)的抑制效率最高,可達(dá)到80%(圖1-4)。**:p<0.01


本文編號：2911466