目的:細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A（cytotoxin-associated antigen A,CagA）是由幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,H.pylori）分泌的重要毒力蛋白,在胃癌的致病中起重要作用。大量研究表明,CagA可以和宿主細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白相互作用,激活多條信號通路,對細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。本課題組在前期的研究工作中證實(shí)CagA可以和胃黏膜細(xì)胞蛋白YWHAE相互作用,激活NF-κB,但是具體的激活途徑尚未闡明。因此,本研究在此基礎(chǔ)上,擬進(jìn)一步研究CagA與YWHAE互作激活NF-κB的具體途徑,并深入探討其引起的細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移效應(yīng),旨在進(jìn)一步闡明CagA的致病機(jī)制。方法:1構(gòu)建腺病毒Ad-CagA首先構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD19-T-CagA,繼而構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pShuttleIRES-hrGFP-CagA,進(jìn)一步利用同源重組的原理,構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒pAdCagA。轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,進(jìn)行病毒包裝,獲得腺病毒Ad-CagA。Ad-CagA和Ad-GFP分別以不同濃度感染AGS細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察熒光的表達(dá)情況,確定最適感染的MOI值,... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

構(gòu)建重組腺病毒流程

pMD19-T-CagA的構(gòu)建

d-CagA 的構(gòu)建和鑒以 Pac I 酶切鑒定，未 和 4.5kb 左右的兩條agA（圖 1.5）。tle-IRES-hrGFP-CagAn of the recombinant phrGFP-CagAShuttle-IRES-hrGFP-ca


本文編號：2907314