【目的】肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是肝臟的原發(fā)性惡性腫瘤,發(fā)病率占全球第五,但嚴(yán)重的預(yù)后不良使得其致死率升至第三。HCC的主要發(fā)病誘因有乙肝病毒（HBV）感染,肝硬化,丙肝病毒（HCV）感染,飲酒過(guò)度及黃曲霉毒素?cái)z入等。Micro RNAs（mi RNAs）是一類在進(jìn)化上高度保守,長(zhǎng)約22nt,由內(nèi)源基因編碼的小非編碼RNA,能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)�，F(xiàn)有大量的實(shí)驗(yàn)研究表明:細(xì)胞內(nèi)的mi RNAs在HCC的病程中亦可發(fā)揮重要作用,而同樣有越來(lái)越多的證據(jù)發(fā)現(xiàn),許多人和動(dòng)物的病毒亦可編碼mi RNAs,并且在宿主細(xì)胞中發(fā)揮作用。在前期研究中,本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)深度測(cè)序以及大量的印證性實(shí)驗(yàn)證明了HBV編碼的mi RNA（HBV-mi R-2）的存在,并且發(fā)現(xiàn)HBV-mi R-2亦可影響肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和增殖能力。本課題主要探究HBV-mi R-2對(duì)下游基因TRIM35和RAN的表達(dá)調(diào)控及其機(jī)制�！痉椒ā繛榱伺宄﨟BV-mi R-2在肝癌細(xì)胞中發(fā)揮作用的機(jī)制,我們首先利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)HBV-mi R-2的候選靶基因,并分析已知的相關(guān)功能,最終選定... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HBV-miR-2與TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR的靶定關(guān)系

圖 1.2 HBV-miR-2 直接靶定 TRIM35 和 RAN 的 3’UTR（A）在 Huh7 和 HepG2 細(xì)胞中，共轉(zhuǎn) pTRIM35-3’UTR 和 pHBV-miR-2；（B）在 HepG2.2.15細(xì)胞中，共轉(zhuǎn) pTRIM35-3’UTR 和 ASO-HBV-miR-2；（C）在 Huh7 和 HepG2 細(xì)胞中，共pRAN-3’UTR 和 pHBV-miR-2 ；（ D ）在 HepG2.2.15 細(xì)胞中，共轉(zhuǎn) pRAN-3’UTR 和ASO-HBV-miR-2 后，檢測(cè) EGFP 的熒光強(qiáng)度。ns: no significant, *意為 P<0.05，**意為 P<0.01，***意為 P<0.001，****意為 P<0.0001。1.2.3 HBV-miR-2 抑制 TRIM35 但促進(jìn) RAN 的 mRNA 和蛋白質(zhì)的表達(dá)我 們 在 上 一 個(gè) 結(jié) 果 中 證 明 了 ， HBV-miR-2 能 靶 定 并 調(diào) 節(jié) 含 有TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR 的熒光報(bào)告載體中 EGFP 的表達(dá)，接下來(lái)就想探究 HBV-miR-2 是否可以調(diào)控內(nèi)源性 TRIM35、RAN 的表達(dá)，在肝癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或封閉 HBV-miR-2 后，利用 RT-qPCR、Western blot 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) TRIM35 和RAN 的表達(dá)水平。結(jié)果顯示（圖 1.3）：在 HepG2 和 Huh7 中，過(guò)表達(dá) HBV-miR-2后，TRIM35 mRNA 的表達(dá)水平分別降低了 40%和 50%左右，蛋白質(zhì)的表達(dá)水

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、確定 HBV-miR-2 的靶基因平分別降低了 42%和 52%；RAN mRNA 的表達(dá)水平分別是對(duì)照組的 6 倍和 7 倍左右，蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別是對(duì)照組的 1.89 倍和 2.06 倍。在 HepG2.2.15 中，封閉 HBV-miR-2 后，TRIM35 mRNA 的表達(dá)水平約是對(duì)照組的 2.3 倍，蛋白質(zhì)的表達(dá)水平是對(duì)照組的 1.45 倍；RAN mRNA 的表達(dá)水平分別減少了 40%左右，蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別減少了 67%。以上結(jié)果表明，HBV-miR-2 負(fù)向調(diào)控TRIM35 但正向調(diào)控 RAN 的 mRNA 和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2905255