第一部分臨床水平研究HMGB1/RAGE與自噬在腎癌組織中的表達【目的】通過檢測腎透明細胞癌的臨床樣本,分析HMGB1/RAGE和自噬相關(guān)標記物(LC3、Beclin-1、PIK3),明確腎癌組織中HMGB1/RAGE的表達和自噬是否具有相關(guān)性,臨床水平研究腎癌中HMGB1/RAGE和自噬的表達情況�！痉椒ā縒estern-Blot、qRT-PCR和免疫熒光法檢測12例腎透明細胞癌和相應(yīng)癌旁組織的HMGB1/RAGE和自噬相關(guān)標記物(LC3、Beclin-1、PIK3)的表達情況�！窘Y(jié)果】1.Western-Blot見腎透明細胞癌中HMGB1蛋白表達水平(0.6138±0.0691)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.2247±0.0512)(P0.001);RAGE蛋白表達水平(0.5467±0.0368)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.2803±0.0415)(P0.001);LC3蛋白表達水平(0.4994±0.0674)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.1293±0.0213)(P0.001);Belcin-1蛋白表達水平(0.5370±0.0608)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.1556±0.0359)(P0.001);PIK3蛋白表達水平(0.4189±0.0570)較癌旁腎組織表達水平(0.2427±0.0463)有升高趨勢(P=0.025)。2.qRT-PCR見腎透明細胞癌中HMGB1 m RNA表達水平(1.1978±0.2311)較癌旁腎組織表達水平(0.8093±0.2531)有增高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P=0.098);RAGE m RNA表達水平(1.7319±0.2784)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.8759±0.2043)(P=0.002);LC3 m RNA表達水平(1.5504±0.1878)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.7423±0.1126)(P=0.004);Belcin-1 m RNA表達水平(1.4572±0.1757)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.6501±0.0530)(P=0.001);PIK3 m RNA表達水平(1.2629±0.1539)明顯高于癌旁腎組織表達水平(0.7201±0.0804)(P=0.001)。3.免疫熒光見腎透明細胞癌中HMGB1/RAGE和自噬蛋白LC3、Beclin-1、PIK3的表達較癌旁正常組織明顯增強�！窘Y(jié)論】腎透明細胞癌組織中HMGB1/RAGE和自噬(LC3,Beclin-1,PIK3)均較癌旁組織明顯升高。HMGB1/RAGE和自噬可能在腎腫瘤中發(fā)揮重要作用,對腎癌的發(fā)生發(fā)展具有臨床意義。第二部分細胞水平研究HMGB1/RAGE對腎癌細胞自噬、凋亡、遷移、增殖和血管生成的影響【目的】通過檢測腎透明細胞癌的臨床樣本,Western-Blot和qRT-PCR方法檢測12例腎透明細胞癌和相應(yīng)癌旁組織的HMGB1/RAGE和自噬相關(guān)標記物(LC3、Beclin-1、PIK3)的表達情況,發(fā)現(xiàn)腎癌組織中HMGB1、RAGE和LC3、Beclin-1、PIK3較癌旁組織中均有明顯升高,初步印證HMGB1/RAGE和自噬可能對腎癌的發(fā)生發(fā)展具有臨床意義。本部分研究旨在通過體外實驗,高表達HMGB1,si RNA沉默HMGB1,可溶性RAGE(s RAGE)阻斷HMGB1和RAGE的結(jié)合,細胞水平證實HMGB1通過結(jié)合RAGE,誘導細胞自噬,降低凋亡水平,促進腎癌細胞血管生成、增殖以及遷移�！痉椒ā窟x用人腎癌細胞株A489、ACHN作為研究對象,分別利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)高表達HMGB1,si RNA干擾技術(shù)沉默HMGB1,s RAGE阻斷HMGB1和RAGE的結(jié)合,缺氧環(huán)境下培養(yǎng)72h后,采用qRT-PCR、Western blot和免疫熒光檢測自噬相關(guān)標記物(LC3、Beclin-1)、HMGB1和RAGE,流式細胞術(shù)和CCK-8檢測細胞凋亡、增殖變化,Transwell小室檢測各組細胞的遷移情況。腎癌細胞與血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng),分別高表達HMGB1、沉默HMGB1,s RAGE阻斷HMGB1和RAGE的結(jié)合,采用qRT-PCR和Western blot檢測VEGF和VEGFR-2反應(yīng)血管生成的基因和蛋白表達變化�！窘Y(jié)果】1.對HMGB1表達進行抑制,可使腎癌細胞的活性和遷移能力減弱,加快腫瘤細胞的凋亡速度。通過CCK8和流式細胞術(shù)檢測各組細胞的生長和凋亡情況,發(fā)現(xiàn)HMGB1的干擾、過表達和s RAGE對A498和ACHN細胞的生長和凋亡有影響。HMGB1-si RNA轉(zhuǎn)染組和s RAGE處理組腎癌細胞的生長被抑制,細胞凋亡明顯增加。Transwell檢測各組A49和ACHN細胞的遷移能力發(fā)現(xiàn),與si RNA轉(zhuǎn)染對照組相比,HMGB1-si RNA轉(zhuǎn)染組和s RAGE處理組細胞遷移能力降低,HMGB1過表達載體組細胞細胞遷移能力上調(diào)。2.HMGB1的干擾、過表達和s RAGE影響A498和ACHN細胞中LC3、Beclin1、RAGE和HMGB1蛋白的表達。采用Western blot和qRT-PCR檢測A498和ACHN各組細胞中LC3、Beclin1、RAGE和HMGB1的m RNA表達水平,發(fā)現(xiàn)與si RNA轉(zhuǎn)染對照組相比,HMGB1-si RNA轉(zhuǎn)染組LC3、Beclin1、RAGE和HMGB1蛋白的表達量顯著降低;與空載載體對照組相比,HMGB1過表達載體組LC3、Beclin1、RAGE和HMGB1蛋白的表達量顯著上調(diào);與s RAGE處理組相比,HMGB1-Vec+s RAGE組LC3、Beclin1、RAGE和HMGB1蛋白的表達量顯著上調(diào)。3.HMGB1的干擾和s RAGE的處理抑制A498和ACHN細胞共培養(yǎng)后HUVEC細胞中VEGF和VEGFR2 m RNA的表達,HMGB1的過表達促進A498和ACHN細胞共培養(yǎng)后HUVEC細胞中VEGF和VEGFR2 m RNA的表達。提示HMGB1的抑制可下調(diào)VEGF和VEGFR2表達,為腎癌介入治療的目標提供了未來方向�！窘Y(jié)論】質(zhì)粒轉(zhuǎn)染高表達HMGB1、si RNA干擾沉默HMGB以及s RAGE阻斷HMGB1和RAGE的結(jié)合,可影響腎癌細胞存活率、凋亡、侵襲、自噬和血管生成能力。HMGB1結(jié)合RAGE可誘導細胞自噬,降低細胞凋亡,促進血管生成,增強腎癌細胞的增殖、遷移能力。HMGB1可能是一個潛在的腎癌診斷和治療的靶點。
【學位單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

第一部分臨床水平研究HMGB1/RAGE與細胞自噬在腎癌組織中表達及兩者相關(guān)性研究背景我們前期分析了 RCC 患者的腫瘤標本，發(fā)現(xiàn) RAGE 在腫瘤組織中明顯高達，尤其在腫瘤血管周圍明顯增多，并與腫瘤的大小、分期具有一定相關(guān)性遠處轉(zhuǎn)移患者的 RAGE mRNA 明顯高于無轉(zhuǎn)移者。隨訪研究中發(fā)現(xiàn) RAGE 的達同患者的 5 年生存率呈負相關(guān)。RAGE 與 RCC 具有的臨床相關(guān)性提示我們RAGE 可能在腎透明細胞癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，但是其作用機制尚明了。

圖2：RAGE在RCC中的表達與患者生存期和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。A：遠處轉(zhuǎn)移患者的RAGE mRNA明顯高于無轉(zhuǎn)移者；B：RAGE的表達與生存率呈負相關(guān)；C:RAGE的表達與無腫瘤轉(zhuǎn)移生存率呈負相關(guān)前期實驗中另外發(fā)現(xiàn)，RAGE在RCC中的表達與腫瘤微血管密度MVD、VEGF-2正相關(guān)。我們從基因和蛋白水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)RAGE表達越高的腫瘤組織中VEGFR-2 mRNA的表達越多，具有明顯正相關(guān)性，VEGFR-2蛋白的水平也有明顯的升高趨勢。

圖2：RAGE在RCC中的表達與患者生存期和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。A：遠處轉(zhuǎn)移患者的RAGE mRNA明顯高于無轉(zhuǎn)移者；B：RAGE的表達與生存率呈負相關(guān)；C:RAGE的表達與無腫瘤轉(zhuǎn)移生存率呈負相關(guān)前期實驗中另外發(fā)現(xiàn)，RAGE在RCC中的表達與腫瘤微血管密度MVD、VEGF-2正相關(guān)。我們從基因和蛋白水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)RAGE表達越高的腫瘤組織中VEGFR-2 mRNA的表達越多，具有明顯正相關(guān)性，VEGFR-2蛋白的水平也有明顯的升高趨勢。
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫偉翔;許惠琴;;RAGE與糖尿病腎病[J];西北藥學雜志;2017年01期

2 彭丁偉;覃月秋;黃冰;黃雨晴;梁燕冰;李軍;韋葉生;黃瑩;廖品琥;;RAGE基因多態(tài)性與膿毒癥易感性研究[J];右江民族醫(yī)學院學報;2017年01期

3 顏彬;展?jié)?王洪偉;郭素芬;安錦丹;成永霞;;普羅布考對大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞RAGE表達的影響[J];山東醫(yī)藥;2013年35期

4 孟政杰,陸茵;RAGE基因表達與糖尿病血管病變[J];國外醫(yī)學.內(nèi)分泌學分冊;2005年02期

5 鄭立紅;張奇兵;牛文全;何蘭;馬洪星;潘洪明;董靜;趙大龍;薛璟;;RAGE和MMP-9在乳腺癌組織中的表達及臨床相關(guān)性研究[J];中國婦幼保健;2015年16期

6 杜歡;郭茂娟;姜希娟;王一婧;胡先同;;RAGE與阿爾茨海默病關(guān)系的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年14期

7 楊斯韜;宋滇平;;RAGE基因多態(tài)性與糖尿病血管并發(fā)癥[J];四川醫(yī)學;2006年05期

8 任曉妹,孫子林;RAGE及其剪接變體與糖尿病血管并發(fā)癥[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2005年02期

9 聶躍華;姜浩;伍尤華;楊立;;RAGE在胃癌組織中的表達及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];實用癌癥雜志;2007年02期

10 喬愛敏;李樂;劉青;;晚期糖基化終產(chǎn)物及其受體RAGE在糖尿病血管并發(fā)癥中的作用機制[J];中國臨床藥理學與治療學;2014年11期

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 郭勇;HMGB1結(jié)合RAGE通過調(diào)控自噬影響腎癌發(fā)展的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學;2018年

2 王紅梅;RAGE及其基因多態(tài)性在肺癌中意義的探討[D];山東大學;2018年

3 李全朋;結(jié)合膽汁酸通過晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）促進膽管癌生長及侵襲作用的分子機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2017年

4 許波;RAGE基因-374T/A多態(tài)性與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性分析[D];山東大學;2016年

5 熱娣;特異性靶向晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）的siRNA降低人類乳腺癌增殖研究[D];中南大學;2013年

6 李泰階;胃癌血清特征性聚糖譜和差異蛋白篩選及RAGE基因多態(tài)性與胃癌發(fā)病風險[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

7 蘭蘭;血、尿標志物RAGE、MCP-1、Fractalkine與狼瘡性腎炎病理分型及預后的初步研究[D];浙江大學;2012年

8 馬春燕;HMGB1及其受體RAGE在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用研究[D];山東大學;2011年

9 陳學博;RAGE在腫瘤微環(huán)境中血管生成作用機制的研究[D];吉林大學;2014年

10 易盼盼;RAGE在不同轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細胞系中的作用及其機制研究[D];中南大學;2012年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 邵婷;AGE、RAGE水平與GDM及新生兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的相關(guān)性研究[D];華北理工大學;2018年

2 馮奇;NRAGE在腸缺血再灌注損傷中作用及機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2017年

3 張業(yè);川崎病患兒循環(huán)內(nèi)皮細胞及其表面RAGE表達的研究[D];浙江大學;2010年

4 張隆;糖基化終產(chǎn)物與其受體RAGE關(guān)系的初步研究和高糖、糖基化終產(chǎn)物對血管細胞的影響[D];華東師范大學;2005年

5 李向南;RAGE中和抗體緩解腰5脊神經(jīng)結(jié)扎大鼠的神經(jīng)病理性疼痛的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

6 高險亭;RAGE信號途徑與老年性聾發(fā)病過程的關(guān)系研究[D];福建醫(yī)科大學;2012年

7 景蓉蓉;RAGE在食管癌和肺癌中的表達及其臨床相關(guān)性研究[D];南通大學;2008年

8 房濤;RAGE與MMP-9在腹主動脈瘤組織中的表達及意義[D];青島大學;2012年

9 邱俊霖;RAGE、VEGF在糖尿病合并結(jié)腸癌的表達及意義[D];廣西醫(yī)科大學;2014年

10 徐積兄;糖化終末產(chǎn)物受體（RAGE）基因-429T/C和-374T/A多態(tài)與2型糖尿病腎病和視網(wǎng)膜病變的相關(guān)研究[D];安徽醫(yī)科大學;2002年

本文編號：2890706