目的探究硬脂酰輔酶A去飽和酶1(Stearoyl-Coenzyme A desaturase1,SCD1)對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲及增殖能力的影響,并初步觀察SCD1對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞上皮組織間充質(zhì)化(EMT)相關(guān)蛋白的改變,為SCD1在乳腺癌的防治中提供理論基礎(chǔ)。方法1.將干擾SCD1基因三個不同位點(diǎn)的SCD1-siRNA利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染至人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,分別作為siRNA1組,siRNA2組,siRNA3組,以及未被轉(zhuǎn)染siRNA的陰性對照組(NC組)。2.轉(zhuǎn)染siRNA后,通過蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot,WB)檢測各組細(xì)胞中SCD1蛋白被干擾后的表達(dá)情況。3.用MTT法檢測人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力;采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測乳腺癌細(xì)胞遷移能力;Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測乳腺癌細(xì)胞侵襲能力。4.利用WB技術(shù)檢測SCD1干擾后乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中上皮組織間充質(zhì)化(EMT)相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,進(jìn)一步驗(yàn)證和分析SCD1對人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲及增殖的影響。結(jié)果1.WB檢測顯示:轉(zhuǎn)染SCD1-siRNA后的三組人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,SCD1蛋白表達(dá)較轉(zhuǎn)染siRNA的陰性對照組(NC組)明顯減少(P0.05)。2.MTT實(shí)驗(yàn)顯示:轉(zhuǎn)染SCD1-siRNA后,SCD1表達(dá)抑制,人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞遷移增殖能力顯著減弱(P0.05)。3.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示:轉(zhuǎn)染SCD1-siRNA后,SCD1表達(dá)抑制,人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲能力顯著減弱(P0.05)。4.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:轉(zhuǎn)染SCD1-siRNA后,SCD1表達(dá)抑制,人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力顯著減弱(P0.05)。5.WB檢測顯示:轉(zhuǎn)染SCD1-siRNA后,SCD1表達(dá)抑制,人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞E-cadherin表達(dá)增加,N-cadherin和β-catenin的表達(dá)均減少(P0.05)。結(jié)論1.SCD1增加MDA-MB-231細(xì)胞體外侵襲、遷移及增殖能力。2.SCD1影響人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 SCD1-siRNA 對 MBA-MB-231 細(xì)胞干擾后 SCD1 蛋白表達(dá)況將干擾 SCD1 基因三個不同位點(diǎn)的 SCD1-siRNA（濃度為 50nM）利用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染至人乳腺癌 MDA-MB-231 細(xì)胞，分別作為 siRNA1 組，siRNA2，siRNA3 組，以及未被轉(zhuǎn)染 siRNA 的陰性對照組（NC 組）。轉(zhuǎn)染 siRNA 后，過蛋白質(zhì)免疫印跡（western blot，WB）檢測各組細(xì)胞中 SCD1 蛋白被干擾后表達(dá)情況如下：SCD1-siRNA 各組 SCD1 蛋白表達(dá)較陰性對照組（NC 組）明減少，說明 SCD1-siRNA 干擾 SCD1 蛋白表達(dá)的效果顯著（P＜0.05）。

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文2 SCD1 低表達(dá)抑制人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231 的增殖能力通過 MTT 法分別檢測 96 孔班接種 24h、48h、72h（即轉(zhuǎn)染 48h、72h、96h）iRNA1 siRNA2 siRNA3 三組實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞和 NC 組細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果如圖，相比于陰性對照 NC 組，siRNA1 siRNA2 siRNA3 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖能力均降低（P＜0.05），這說明：干擾 SCD1 蛋白可顯著減低 MDA-MB-231 細(xì)胞殖能力。

第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3 SCD1 低表達(dá)抑制人乳腺癌細(xì)胞 MD1-MB-231 細(xì)胞遷分別取轉(zhuǎn)染 SCD1-siRNA 后 0H 24H 48H 72H 這四個點(diǎn)觀察四組情況，發(fā)現(xiàn)相比于陰性對照 NC 組，siRNA1 siRNA2 siRNA3 實(shí)驗(yàn)組能力均明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。NC siRNA1 siRNA2 siRNA3
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2876979