發(fā)布時間：2020-10-17 22:12

　　 CA19-9是一種糖蛋白,在胰腺癌、膽道癌、結(jié)腸癌、胃癌等惡性腫瘤患者體內(nèi)高水平表達,因此檢測CA19-9的含量可以對相關(guān)惡性腫瘤進行早期篩查及輔助診斷。目前,臨床上針對CA19-9的檢測方法有許多,隨著國家分級診療制度的建設(shè),急需適用于基層醫(yī)療單位的床旁快速檢測方法。隨著體外診斷技術(shù)的快速發(fā)展,熒光免疫層析技術(shù)現(xiàn)已成為床旁快速檢測的重要手段之一�；诖�,本研究擬建立一種新型熒光免疫層析定量檢測CA19-9的方法。主要采用雜交瘤技術(shù)制備CA19-9單克隆抗體,篩選出符合要求的CA19-9配對單克隆抗體用于熒光免疫層析檢測方法的建立。在此基礎(chǔ)上,利用熒光免疫層析技術(shù),以羧基熒光微球為標記物,NC膜為載體,將篩選的CA19-9配對抗體分別進行標記和包被,并對試紙條制備過程中的主要原材料進行篩選,對工藝、最佳反應時間進行優(yōu)化,制備定量檢測血清中CA19-9的熒光免疫層析檢測試紙條。通過對試紙條的線性范圍、精密性、特異性等性能指標進行檢測比對,以評價本研究建立的CA19-9熒光免疫層析定量檢測方法。本研究篩選得到2對較優(yōu)的CA19-9單克隆抗體配對組合,利用熒光免疫層析法進行進一步的應用篩選,其中以M-2E3、M-2D8作為配對抗體制備的試紙條的性能最優(yōu)。經(jīng)工藝優(yōu)化,試紙條最佳檢測時間為15min,得到的線性方程為y=0.0069x+0.0223,R~2=0.9865,檢測線性范圍為12.5-800 U/mL;最低檢出限為9.74 U/mL,批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)均小于15%,平均回收率為101%;試紙條37℃加速破壞24天穩(wěn)定性良好,與羅氏CA19-9試劑盒(電化學發(fā)光法)平行檢測50份臨床樣本,R~2=0.9886,回歸方程為y=0.9884x+3.8191,相關(guān)性良好。本研究成功制備了適用于熒光免疫層析檢測方法的CA19-9配對單克隆抗體,初步建立了定量檢測血清中CA19-9的熒光免疫層析檢測方法,有較好的臨床應用前景。
【學位單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R730.43
【部分圖文】：

圖 2-1 熒光層析試紙條組成19-9 熒光免疫層析試紙條進的 C 線和 T 線后，在紫外檢光值。點樣反應完全后，試示熒光則試紙條無效；如果測限；如果 C、T 均顯示熒Test line檢測線1 2 3 4

圖 3-1 4 株 CA19-9 單抗 SDS-PAGE 純度鑒定注：1：M-1C4；2：M-2D8；3：M-2E3；4：M-2G3；亞型鑒定盒對 4 株 CA19-9 單抗進行亞型分析，結(jié)果如表 D8、M-2E3 單克隆抗體亞型均為 IgG1，M-2G3 單表 3-8 單克隆抗體亞型鑒定IgG2a-HRP IgG2b-HRP IgG3-HRP IgA-HRP 0.073 0.075 0.033 0.054 0.088 0.047 0.065 0.032 0.049 0.046 0.067 0.078 0.065 0.087 1.723 0.098 特異性鑒定

圖 3-2 熒光微球稀釋后熒光強度檢測表 3-12 檢測試紙條檢測線（T 線）熒光強度T 值 1 號 2 號 3 號基質(zhì)血清 164±16 147±14 254±24100 U/mL 16743±301 22365±424 20178±378 膜的選擇如表3-13所示，HBRC-90與HBRC-12制備的試紙條檢測靈敏度高，而的速度快，背景干凈，因此選擇型號為 HBRC-90 的 NC 膜進行 CA1測試紙條的制備。表 3-13 NC 膜的選擇C 膜 HBRC-90 HBRC-12 HBR景 干凈 有熒光 有熒
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本文編號：2845370