研究背景:多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是造血系統(tǒng)來源的惡性腫瘤,以患者骨髓中惡性漿細(xì)胞克隆性增生,分泌大量單克隆免疫球蛋白和/或輕鏈為其特征,其發(fā)病率高居血液系統(tǒng)腫瘤第二位。貧血,腎功能異常,高鈣血癥以及溶骨性破壞是主要的臨床表現(xiàn),也被稱為骨髓瘤相關(guān)事件。骨髓瘤溶骨性病變是MM的重要臨床特征之一,約90%的患者可以出現(xiàn)不同程度的骨損害,導(dǎo)致骨骼疼痛、病理性骨折,神經(jīng)壓迫以及高鈣血癥,溶骨性病變的嚴(yán)重程度與MM腫瘤負(fù)荷與預(yù)后密切相關(guān),嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此,進(jìn)一步研究MM及其溶骨性病變的發(fā)生機(jī)制,尋找新的治療靶點是MM臨床轉(zhuǎn)化研究中亟待解決的問題。組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)廣泛表達(dá)于機(jī)體細(xì)胞,與細(xì)胞的分化發(fā)育以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。HDACs通過去乙酰化功能,不僅可以修飾組蛋白的乙�；潭�,調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu),抑制基因表達(dá);同時,也可以通過去乙酰化修飾轉(zhuǎn)錄因子如RUNX2等,進(jìn)而抑制相關(guān)下游基因的表達(dá),從而直接或間接的參與調(diào)控的生存、增殖、分化和凋亡等過程。研究發(fā)現(xiàn),HDACs在多種腫瘤中呈高表達(dá),通過抑制抑癌基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),阻礙正常細(xì)胞的分化成熟,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。在多發(fā)性骨髓瘤中,HDAC3可以通過激活JAK2/STAT3通路,促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞的增殖,提示HDACs在可能在MM發(fā)生中起到了一定作用。不僅如此,HDACs還可正向調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的分化成熟,同時抑制成骨細(xì)胞的功能,提示HDACs可能參與了骨髓瘤溶骨性病變的發(fā)生和發(fā)展。組蛋白去乙�；敢种苿ヽhidamide是我國自主研發(fā)的第一個口服的組蛋白去乙酰化酶亞型抑制劑,通過抑制其靶點HDAC1,2,3以及HDAC10,可以調(diào)控腫瘤異常表觀遺傳學(xué),增加組蛋白乙�；�,重塑染色質(zhì),誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡與周期阻滯。本文擬通過體內(nèi)外實驗探討chidamide治療骨髓瘤溶骨性病變的具體分子機(jī)制,為多發(fā)性骨髓瘤溶骨性病變的治療提供新的觀點。研究目的:1、明確chidamide對MM細(xì)胞內(nèi)HDACs功能的影響以及chidamide對MM細(xì)胞體內(nèi)外的殺傷作用及其具體機(jī)制。2、研究在腫瘤微環(huán)境下,chidamide對MM細(xì)胞的殺傷作用,分析chidamide對MM全身播散性小鼠模型溶骨性病變的抑制作用。3、研究chidamide對破骨細(xì)胞分化成熟的影響及其機(jī)制,分析非腫瘤情況下chidamide對RANKL誘導(dǎo)的小鼠急性骨損傷的保護(hù)作用。研究方法:1、利用CCK-8,流式細(xì)胞術(shù)檢測chidamide對MM細(xì)胞的生長抑制作用和細(xì)胞殺傷作用。2、Western blot以及流式細(xì)胞術(shù)檢測chidamide作用MM細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平變化。3、利用NOD/SCID小鼠構(gòu)建人MM細(xì)胞株來源的皮下瘤小鼠模型研究chidamide的體內(nèi)抗腫瘤作用。4、結(jié)合NCG小鼠構(gòu)建MM播散性小鼠模型,利用小動物活體熒光成像,micro-CT,ELISA等方法研究chidamide對MM溶骨性病變的抑制作用。5、通過TRAP染色,肌動蛋白環(huán)形成實驗以及鈣包被板吸收形成實驗研究chidamide對RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟及其功能的影響。6、構(gòu)建RANKL誘導(dǎo)的急性骨損傷小鼠模型,利用micro-CT,ELISA等方法檢測chidamide對正常小鼠的骨保護(hù)作用。研究結(jié)果:1、Western blot檢測發(fā)現(xiàn)MM細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)chidamide靶分子HDAC1,2和HDAC3。CCK-8提示chidamide作用MM細(xì)胞48小時和72小時后可以顯著抑制MM細(xì)胞株的增殖;流式細(xì)胞術(shù)提示chidamide可以誘導(dǎo)MM細(xì)胞凋亡,呈劑量依賴性和時間依賴性。2、Chidamide通過促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)caspase家族蛋白,誘導(dǎo)MM細(xì)胞凋亡;凋亡可以被pan-caspase抑制劑Q-VD-Oph所抑制。Chidamide作用MM細(xì)胞后,western blot提示p-STAT3表達(dá)量減少,P21,P27的表達(dá)增高,CDK4.CDK6,cyclin-D2表達(dá)量下降,細(xì)胞周期檢測提示細(xì)胞G1期阻滯。3、Chidamide可以抑制小鼠皮下腫瘤的生長,減輕小鼠腫瘤負(fù)荷,瘤體免疫組化提示bcl-xL,caspase3等表達(dá)下調(diào),與細(xì)胞體外實驗一致。4、Chidamide在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞存在的條件下,仍然對MM細(xì)胞具有殺傷作用;同時chidamide可以逆轉(zhuǎn)破骨細(xì)胞對MM細(xì)胞的保護(hù)作用。播散性MM小鼠模型提示chidamide不僅可以降低小鼠腫瘤負(fù)荷,還可以減輕MM相關(guān)溶骨性病變。5、體外實驗提示chidamide可以抑制RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟,減輕RANKL介導(dǎo)的小鼠急性骨損傷。結(jié)論:1、Chidamide可以抑制MM細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)MM細(xì)胞凋亡與周期阻滯。2、Chidamide可以抑制小鼠體內(nèi)MM腫瘤細(xì)胞的生長,減輕小鼠腫瘤負(fù)荷,同時抑制MM溶骨性病變的發(fā)生。3、Chidamide可以抑制RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟,減輕RANKL介導(dǎo)的小鼠急性骨損傷。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.3
【部分圖文】：

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一部分Ｃｈｉｄａｍｉｄｅ對ＭＭ細(xì)胞的體內(nèi)外殺傷作用及其機(jī)制研究逡逑然后，我們我們檢測了邋ｃｈｉｄａｍｉｄｅ對ＭＭ細(xì)胞株內(nèi)組蛋白去乙�；囊种谱麇义嫌谩＃茫瑁椋洌幔恚椋洌逡蕴幚頋舛冗f增的方式處理ＡＲＰ－１和ＲＰＭＩ－８２２６細(xì)胞株４８小時。逡逑＼￥６５１６0＾１0１檢測發(fā)現(xiàn)也（＾１１１此可以顯著的提高姐蛋白１＾３１０８，出１＜９以及１４４１＜：８逡逑位點的乙�；S著ｃｈｉｄａｍｉｄｅ濃度的升高，各位點的乙酰化程度增強(qiáng)，呈ｃｈｉｄａｍｉｄｅ逡逑濃度依賴性（圖２．１．３）。逡逑

＼￥６５１６0＾１0１檢測發(fā)現(xiàn)也（＾１１１此可以顯著的提高姐蛋白１＾３１０８，出１＜９以及１４４１＜：８逡逑位點的乙�；S著ｃｈｉｄａｍｉｄｅ濃度的升高，各位點的乙酰化程度增強(qiáng)，呈ｃｈｉｄａｍｉｄｅ逡逑濃度依賴性（圖２．１．３）。逡逑ＡＲＰ－ｌ邐ＲＰＩＶ１１－８２２０逡逑Ａｃｅ－Ｈ３Ｋ１８邋邐ＷｊＴ邋＾＜１—＾邐＞逡逑Ａｃｅ－Ｈ３Ｋ９邐？「．一邋丨丨１．．１１１邋ｎＴ邐ｎ，邋一逡逑ＡＣ－Ｈ４Ｋ８邐．．．ｒ．ｘ＇�。ж哌姡恚恚恚礤濉鲐撸撸撸撸咤澹咤澹撸咤义线娺娺姡姡郏椋殄澹瑁殄澹у澹椋铄澹保保卞澹瑁殄澹椋铄濉桑ⅲ椋咤澹蒎义希悖瑁椋洌幔恚椋洌暹�0邋０．７５邐１．５邐３邋｜ａＩＶＩ邐０邐１２邐４邋＼ｊ．Ｍ逡逑圖２．１．３：邋Ｃｈｉｄａｍｉｄｅ抑制組蛋白去乙酰化酶功能。Ｃｈｉｄａｍｉｄｅ以處理濃度遞增的逡逑方式處理ＡＲＰ－１和ＲＰＭＩ－８２２６細(xì)胞株４８小時，可以顯著的提高組蛋白Ｈ３Ｋ１８，逡逑Ｈ３Ｋ９以及Ｈ４Ｋ８位點的乙�；蕽舛纫蕾囆�。逡逑最后，為了觀察ｃｈｉｄａｍｉｄｅ是否在抑制ＭＭ細(xì)胞內(nèi)ＨＤＡＣ蛋白活性的同時抑逡逑制細(xì)胞內(nèi)ＨＤＡＣ蛋白的表達(dá)量，因此，我們使用不同濃度的ｃｈｉｄａｍｉｄｅ處理ＡＲＰ－１逡逑和ＲＰＭＩ－８２２６細(xì)胞株４８ｈ后檢測ＨＤＡＣ１，邋ＨＤＡＣ２，邋ＨＤＡＣ３和ＨＤＡＣ１０的表達(dá)量逡逑變化。我們發(fā)現(xiàn)ｃｈｉｄａｍｉｄｅ基本不影響ＨＤＡＣ１，邋ＨＤＡＣ２，邋ＨＤＡＣ３和ＨＤＡＣ１０的逡逑表達(dá)量（圖２．１．４）。逡逑Ｉ逡逑１９逡逑

圖２．２．２：邋ｃｈｉｄａｍｉｄｅ誘導(dǎo)ＭＭ細(xì)胞凋亡，該作用可以被Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ所抑制。逡逑如圖所致，ｃｈｉｄａｍｉｄｅ單藥作用ＡＲＰ－１和ＭＭ．ｌｓ細(xì)胞株４８ｈ后，隨著藥物作用濃逡逑度的增加，ＭＭ活細(xì)胞數(shù)量減少。當(dāng)使用Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ與ｃｈｉｄａｍｉｄｅ共同作用ＭＭ逡逑細(xì)胞株時，ｃｈｉｄａｍｉｄｅ所誘導(dǎo)的活細(xì)胞數(shù)明顯增加。逡逑

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3 田瑞璧;髕骨溶骨性病變[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊);1990年02期

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5 黃正順,黃云較,方克灶;骨盆溶骨性病變的平片與CT對照研究[J];實用放射學(xué)雜志;2001年08期

6 鐘美佐，舒義剛，譚柏林，李曉林;非何杰金淋巴瘤溶骨性病變一例[J];湖南醫(yī)學(xué);1995年05期

7 周兵;吳春根;程永德;李明華;顧一峰;王玨;張蓓蕾;;經(jīng)皮骨成形術(shù)治療椎體外惡性溶骨性病變的療效分析[J];介入放射學(xué)雜志;2009年01期

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10 莊伯蓁;繼發(fā)于創(chuàng)傷的顱骨溶骨性病變[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊);1991年03期

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本文編號：2810109