研究背景:乳腺癌是在全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致女性死亡常見的幾種惡性腫瘤之一,目前針對乳腺癌生物標(biāo)志物和免疫學(xué)的治療研究均已開展,挖掘與乳腺癌有關(guān)的標(biāo)志物對于制定乳腺癌患者的預(yù)防和治療策略尤為重要。STEAP1(six-transmembrane epithelial antigen of the prostate 1)最初是在前列腺癌中發(fā)現(xiàn),作為細(xì)胞表面抗原,主要定位在細(xì)胞膜上,在細(xì)胞連接或細(xì)胞黏連中作為離子通道或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與細(xì)胞通訊�；赟TEAP1作為靶點(diǎn)的抗體免疫治療已經(jīng)應(yīng)用于前列腺癌中,關(guān)于乳腺癌與STEAP1關(guān)系的研究,國內(nèi)尚未開展,國外研究較少且結(jié)論不一,對其作用機(jī)制的了解甚少。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)與癌癥的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。在EMT進(jìn)展期間,細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)和形態(tài)改變,上皮細(xì)胞粘附和細(xì)胞極性消失,運(yùn)動能力顯著增加。上皮細(xì)胞獲得間充質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)和特征,從而增強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲能力。對EMT生物標(biāo)志物的研究已廣泛開展。STEAP1參與細(xì)胞連接以及細(xì)胞通訊,與EMT過程可能存在一定相關(guān)性,通過研究STEAP1表達(dá)與EMT標(biāo)志物的關(guān)系,可以探究STEAP1在EMT過程中發(fā)揮的作用。研究目的1.探究STEAP1在乳腺癌中的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系。2.慢病毒介導(dǎo)的STEAP1表達(dá)的變化對乳腺癌細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞的運(yùn)動和增殖的影響。3.探究STEAP1影響乳腺癌發(fā)生和進(jìn)展的作用機(jī)制。研究方法1.免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測正常乳腺組織,良性纖維腺瘤和癌組織中STEAP1的表達(dá)。2.逆轉(zhuǎn)錄-定量聚合鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(RT-qPCR)、免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)和免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)(ICC)檢測乳腺上皮細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞中STEAP1的表達(dá)情況;3.運(yùn)用公共數(shù)據(jù)庫Oncomine和Kaplan-Meierplotter從大數(shù)據(jù)中探尋STEAP1在乳腺癌中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系;4.利用慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染,增強(qiáng)STEAP1在乳腺癌細(xì)胞MCF-7的表達(dá),降低STEAP1在乳腺上皮細(xì)胞HBL-100的表達(dá),并通過RT-qPCR、Western blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率;5.使用Transwell,生長曲線和流式細(xì)胞術(shù)來檢測STEAP1表達(dá)對乳腺細(xì)胞運(yùn)動和增殖的影響。6.RT-qPCR檢測轉(zhuǎn)染前后乳腺細(xì)胞中EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)情況。研究結(jié)果1.免疫組織化學(xué)結(jié)果表明STEAP1在正常乳腺組織和良性纖維腺瘤中的表達(dá)水平程度明顯高于乳腺癌組織,且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及組織學(xué)分級有關(guān),STEAP1表達(dá)高者生存時(shí)間更長;2.RT-qPCR、ICC及Western blot表明STEAP1 mRNA及蛋白質(zhì)在乳腺上皮細(xì)胞HBL-100中表達(dá)明顯高于乳腺癌細(xì)胞系BT549、MDA-MB-468和MCF-7;3.公共數(shù)據(jù)庫分析顯示,乳腺癌組織中STEAP1 mRNA的表達(dá)水平顯著低于正常組織,且STEAP1表達(dá)水平越高,預(yù)后越好。4.熒光顯微鏡下觀察慢病毒轉(zhuǎn)染效率超過80%,RT-qPCR以及Western blot均驗(yàn)證;5.慢病毒介導(dǎo)STEAP1過表達(dá)后,乳腺癌細(xì)胞遷移、侵襲能力降低(P0.05),增殖能力無明顯變化;RNA干擾降低STEAP1表達(dá)后,乳腺上皮細(xì)胞遷移、侵襲能力增強(qiáng)(P0.05),增殖能力無明顯變化;6.慢病毒介導(dǎo)STEAP1過表達(dá)后,乳腺癌細(xì)胞中MMP2、MMP9、MMP13、VIM、CDH2表達(dá)降低,CDH1表達(dá)增高,EMT過程受到抑制;RNA干擾降低STEAP1表達(dá)后,乳腺上皮細(xì)胞HBL-100中MMP2、MMP9、MMP13、VIM、CDH2表達(dá)增高,CDH1表達(dá)降低,促進(jìn)了 EMT進(jìn)展。研究結(jié)論1.STEAP1在乳腺癌中的表達(dá)低于正常組織,是乳腺癌中的抑癌因子;2.STEAP1的表達(dá)可抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力;3.STEAP1在乳腺癌中的作用機(jī)制與EMT有關(guān),其表達(dá)能抑制EMT進(jìn)展。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

４．１．１邐ＳＴＥＡＰ１在乳腺組織的表達(dá)逡逑免疫組化結(jié)果表明，ＳＴＥＡＰ１在正常乳腺組織和乳腺纖維腺瘤中的表達(dá)程度明顯逡逑高于乳腺癌，且染色主要是集中在胞膜和胞漿，在細(xì)胞核中沒有表達(dá)，見圖１。逡逑在正常乳腺組織中ＳＴＥＡＰ１高表達(dá)者所占百分率為８５％邋（３４／４０），乳腺纖維腺瘤逡逑中為８４．６％邋（４４／５２），邐明顯高于乳腺癌組織的１１．８％邋（２５／２１１），卡方檢驗(yàn)結(jié)果逡逑顯示Ｐ＜０．０１，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表１。進(jìn)一步兩兩比較，ＳＴＥＡＰ１在正常乳逡逑腺組織和纖維腺瘤的表達(dá)水平均顯著高于癌組織（Ｐ＜０．０１），而正常乳腺組織和逡逑纖維腺瘤間的表達(dá)水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。逡逑２３逡逑

根據(jù)乳腺癌患者ＳＴＥＡＰ１表達(dá)情況，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，對兩逡逑組乳腺癌患者進(jìn)行Ｋａｐｌａｎ－ｍｅｉｅｉ？生存分析，結(jié)果顯示ＳＴＥＡＰ】高表達(dá)的病例預(yù)后逡逑好于低表達(dá)病例，生存時(shí)間更長（尸＜０．０５），見圖２。逡逑Ｓｕｒｖｉｖａｌ邋Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ逡逑ｉａ￣邋＝＾ｕ逡逑＼邋Ｈ邐￣ｌ＿邐ｈｉＫｈ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑０＾２２逡逑°－８￣邐Ｌ邋－ｒ邐￣Ｌ—邐ｌｏｗ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑Ｉ邐＼逡逑！邋ｗ邐ｖ邐ｉ—一逡逑？邐ｎ－１５８邐＼邐—Ｉ逡逑Ｕ邋０－４－邐＼邐Ｌ逡逑ｕ邐尸邋＜０．０５邐Ｉ邐，逡逑°－２￣逡逑０Ｊ０－邐邐＊逡逑ｎ￣￣ｉ邐：邐ｉ邐ｉ邐＼￣＊￣￣￣￣逡逑２０Ｘ１０邐４０Ｊ５Ｕ邐６０邋Ｊ０Ｑ邐８０＊００邐１？ＯＸ）０逡逑Ｔｉｍ＃ǎ椋睿酰睿簦歟椋螅

本文編號：2809555