【摘要】：目的:1.探討胰腺癌患者中的免疫學失調情況;2.明確胰蛋白酶與胰腺癌之間存在的關系;3.在體內體外分別驗證胰蛋白酶影響TCR的表達情況。方法:1.血液樣本收集本課題收集了從2015年12月至2017年12月之間入住福建醫(yī)科大學附屬第一病院肝膽外科,行外科手術切除并經(jīng)過術后病理金標準確診,且全部的相關的臨床資料完整的胰腺癌患者的外周血液標本共103例。在本課題所入選的所有收集的外周血液樣本的胰腺癌患者,在手術前均未接受任何的化療、放療及分子靶向及中藥中藥等治療。2.患者入院術前血常規(guī)數(shù)據(jù)收集。收集課題時間跨度中的103例符合標準的胰腺癌患者及正常體檢人群369例血常規(guī)中的淋巴細胞計數(shù)。3.胰腺癌患者胰蛋白酶PRSS1表達的檢測。將所有收集的103例胰腺癌患者和369例正常體檢人群為對照組的血液標本,血液標本放置于-80度冰箱,進行DNA提取,行PCR擴增,基因測序,最后行ELISA試劑盒測血清胰蛋白酶濃度。4.檢測胰蛋白酶PRSS1過表達的胰腺癌細胞株、動物模型與對照的空載胰腺癌細胞株、動物模型(PRSS1正常表達)中TCRVβ各基因型的表達情況。5.檢測胰蛋白酶PRSS1過表達的胰腺癌細胞株與對照的空載胰腺癌細胞中的CD抗原、白介素及MAPK的表達情況。6.實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計將本課題實驗所得的所有數(shù)據(jù)全部逐一錄入SPSS19.0軟件中,并對所有的數(shù)據(jù)進行多次核對確認,準確核對無誤后,并再對所有數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)的統(tǒng)計分析。采用χ2檢驗分析胰蛋白酶PRSS1在不同基因型及不同分期的胰腺癌患者中的表達情況同胰腺癌患者的臨床病理參數(shù)存在相關性。應用T檢驗分析胰蛋白酶PRSS1過表達的淋巴細胞計數(shù)、TCRVβ細胞株及小鼠模型中的表達情況。用F檢驗分析胰腺癌細胞株及小鼠模型中的CD抗原、白介素及MAPK數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程中所用的假設檢驗均是應用雙側檢驗,當P0.05時,被認為有著統(tǒng)計學差異。結果:1.基因測序結果顯示PRSS1在胰腺癌患者中呈高表達,PRSS1 SNP位點T/C基因型與T/T、C/C基因型有明顯差異,PRSS1表達與胰腺癌分期、生存期有關。2.胰腺癌患者與正常人群對比淋巴細胞計數(shù)差異明顯低于正常人群,P0.05有統(tǒng)計學意義。3.統(tǒng)計學分析顯示胰腺癌患者胰蛋白酶PRSS1表達情況與年齡、性別、手術切緣、腫瘤大小、腫瘤位置、是否淋巴結轉移、是否存在神經(jīng)侵犯、是否存在遠處轉移、腫瘤細胞的分化程度、是否出現(xiàn)神經(jīng)侵犯等情況無明顯的相關性,而與胰腺癌患者的臨床分期、是否存在淋巴結轉移有著顯著相關性。4.在PRSS1過表達的胰腺癌患者其TCRVβ中的Dβ1的表達降低,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義。5.胰腺癌胰蛋白酶PRSS1過表達細胞株與對照空載組細胞株的CD抗原(CD3D、CD5、CD14、CD27、CD164)表達明顯降低、白介素(IL6R、IL6ST、IL7、IL7R、IL8、IL13RA1、IL13RA2、IL15、)表達明顯增高及MAPK中(MMP2、MAP2K4、MAP2K5、MAP3K1、MAP3K2、MAP3K4、MAP3K5、MAP3K7、MAP3K8)等表達明顯增強。6.統(tǒng)計學分析顯示胰蛋白酶PRSS1過表達的胰腺癌細胞株與對照空載的胰腺癌細胞株的CD抗原、白介素及MAPK表達有差異,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義。結論:1.與正常人群對比PRSS1在胰腺癌患者中存在高表達;在胰腺癌的不同期患者中PRSS1的表達差異有著統(tǒng)計學意義;胰蛋白酶PRSS1與胰腺癌患者的臨床分期、生存期存在明顯相關性。2.胰腺癌患者與正常同期體檢人群比較,胰腺癌患者的淋巴細胞計數(shù)低,差異有統(tǒng)計學意義。3.胰蛋白酶PRSS1在胰腺癌患者的疾病發(fā)展過程中存在相關性。與胰腺癌患者的年齡、性別、淋巴結轉移、神經(jīng)侵犯、遠處轉移、腫瘤細胞的分化程度、是否出現(xiàn)神經(jīng)侵犯等情況無明顯的相關性,而與胰腺癌患者的臨床分期、是否存在淋巴結轉移有著顯著相關性。4.胰蛋白酶PRSS1被認為可能是提示胰腺癌預后的有效的生物學指標,當胰蛋白酶的表達水平越高時,胰腺癌患者的預后越差。5.PRSS1過表達的胰腺癌細胞株、小鼠模型與對照空載的胰腺癌細胞株、小鼠模型的TCR Dβ1的表達存在差異,過表達細胞株及動物模型中的Dβ1表達明顯高于對照組,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義。6.PRSS1過表達的胰腺癌細胞株與對照空載組細胞株的CD抗原、白介素及MAPK的表達存在明顯差異,過表達的PRSS1可能通過改變胰蛋白酶濃度,使胰腺癌患者癌細胞的微環(huán)境發(fā)生變化,從而影響胰腺癌的進展,可能是通過對MAPK途徑的調控影響胰腺癌發(fā)展。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.9

【參考文獻】

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本文編號：2792356