發(fā)布時(shí)間：2020-07-14 07:43

【摘要】：目的:髓系腫瘤主要包括急性髓系白血病(AML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、慢性骨髓增殖性腫瘤(c MPN)。由于髓系腫瘤的臨床及遺傳學(xué)異質(zhì)性高,其具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前,隨著對(duì)髓系腫瘤發(fā)生機(jī)制的深入探究,發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多的腫瘤細(xì)胞存在表觀遺傳學(xué)異常,它主要通過(guò)DNA的甲基化、染色質(zhì)重塑、組蛋白修飾和非編碼RNA調(diào)控等方式來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)。組蛋白修飾主要包括甲基化、乙�；⒘姿峄头核鼗�,其中賴氨酸甲基化在組蛋白修飾中尤為重要。組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶1(LSD1)是一個(gè)黃素腺嘌呤二核苷酸依賴的氨基氧化酶,它是真正意義上的首個(gè)組蛋白賴氨酸去甲基化酶,主要通過(guò)氨基氧化作用生成去甲基化的賴氨酸殘基和甲醛,從而達(dá)到去甲基化的目的。包含有SET結(jié)構(gòu)域的甲基轉(zhuǎn)移酶催化完成組蛋白賴氨酸的甲基化,H3K4及H3K36的甲基化通常與染色質(zhì)激活有關(guān),而H3K9、H4K20及H3K27的甲基化則與基因沉默相關(guān)。組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(EZH2)催化H3K27位點(diǎn)的甲基化,使抑癌基因沉默,進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。這使人們認(rèn)識(shí)到組蛋白的甲基化是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程,組蛋白去甲基化酶與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的失調(diào)可導(dǎo)致組蛋白甲基化失衡,近期研究表明,組蛋白去甲基化酶與甲基轉(zhuǎn)移酶的失衡與髓系腫瘤的發(fā)生緊密相關(guān)。因此,更加深入地探究組蛋白去甲基化酶與甲基轉(zhuǎn)移酶在髓系腫瘤的發(fā)生機(jī)制,具有極其重要的指導(dǎo)意義。方法:本實(shí)驗(yàn)收集了河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院首診髓系腫瘤患者的骨髓液70例,其中AML 40例、MDS 15例、c MPN 15例(原發(fā)性血小板增多癥ET 7例、真性紅細(xì)胞增多癥PV 5例、原發(fā)性骨髓纖維化MF 3例),緩解后AML 16例以及非惡性血液病患者骨髓液17例設(shè)為對(duì)照組。通過(guò)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BM-MNCs)中LSD1 m RNA的表達(dá)水平,ELISA酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞中LSD1蛋白及EZH2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1 LSD1 m RNA的表達(dá)情況RT-PCR結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.9925±0.1958)pg/ml、(0.9536±0.1603)pg/ml、(1.0062±0.1675)pg/ml,緩解后AML組LSD1m RNA的相對(duì)表達(dá)量為(0.9515±0.1015)pg/ml,對(duì)照組LSD1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量為(0.9621±0.1687)pg/ml。初治AML組LSD1 m RNA表達(dá)量與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.587);MDS組患者LSD1 m RNA表達(dá)量與對(duì)照組表相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.911);c MPN組LSD1 m RNA表達(dá)量與對(duì)照組相比亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.544);初治AML組與緩解后AML組LSD1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.465),緩解后AML組與對(duì)照組LSD1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.862)。2 LSD1蛋白表達(dá)情況ELISA酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(18.5737±1.8809)pg/ml、(12.5276±1.3824)pg/ml、(12.0236±1.1412)pg/ml,緩解后AML組LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量為(8.5756±1.5808)pg/ml,對(duì)照組LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量為(4.6231±1.3155)pg/ml。初治AML組LSD1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);MDS組LSD1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);c MPN組LSD1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);緩解后AML組LSD1蛋白表達(dá)量與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00),緩解后AML組LSD1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。初治AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(18.4879±2.1489)pg/ml、(18.6596±1.8493)pg/ml、(18.5878±1.7078)pg/ml,各組之間LSD1蛋白相對(duì)表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.972);初治AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(18.3177±2.1077)pg/ml、(18.6280±1.8605)pg/ml,兩組之間LSD1蛋白相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.697);初治AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其LSD1蛋白的相對(duì)結(jié)果:表達(dá)量分別為(18.6377±2.0178)pg/ml、(18.4871±1.7353)pg/ml,兩組之間LSD1蛋白相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.806);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(13.7541±0.7302)pg/ml、(11.4544±0.7377)pg/ml,高危組患者LSD1蛋白表達(dá)量與中低危組患者相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其LSD1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(12.1291±1.0428)pg/ml、(12.3386±1.3338)pg/ml、(11.2523±1.0570)pg/ml,各組之間LSD1蛋白相對(duì)表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.436)。3 EZH2蛋白的表達(dá)情況ELISA酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(268.2885±16.4276)pg/ml、(204.5954±17.7583)pg/ml、(199.3212±10.8547)pg/ml,緩解后AML組EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量為(194.8555±12.9244)pg/ml,對(duì)照組EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量為(175.3548±13.9937)pg/ml。AML患者EZH2蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);MDS患者EZH2蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);c MPN患者EZH2蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);緩解后AML組EZH2蛋白表達(dá)量與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00),緩解后AML組EZH2蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(267.8381±17.1344)pg/ml、(266.6426±18.0838)pg/ml、(270.63463±14.7275)pg/ml,各組之間EZH2蛋白相對(duì)表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.832);AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(267.6477±17.4577)pg/ml、(269.2461±16.2742)pg/ml,兩組之間EZH2蛋白相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.817);AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(267.3703±16.5247)pg/ml、(269.5308±16.7175)pg/ml,兩組之間EZH2蛋白相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.686);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(221.3522±7.7296)pg/ml、(189.9333±7.2821)pg/ml,高危組患者EZH2蛋白表達(dá)量與中低危組患者相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其EZH2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(202.0684±8.5480)pg/ml、(201.0672±13.6585)pg/ml、(190.0010±8.2533)pg/ml,各組之間EZH2蛋白相對(duì)表達(dá)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.264)。4 LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0693±0.0066)、(0.0615±0.0073)、(0.0603±0.0035),緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值為(0.0437±0.0053),對(duì)照組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值為(0.0260±0.0056)。AML患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);MDS患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);c MPN患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00);緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00),緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對(duì)照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0690±0.0070)、(0.0701±0.0067)、(0.0688±0.0066),各組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.876);AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0684±0.0062)、(0.0692±0.0066),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.757);AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0698±0.0072)、(0.0686±0.0059),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.601);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0621±0.0025)、(0.0603±0.0039),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.315);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0600±0.0044)、(0.0612±0.0027)、(0.0592±0.0031),各組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.738)。5 LSD1蛋白與EZH2蛋白表達(dá)的相關(guān)性將103例標(biāo)本(初治AML組40例、MDS組15例、c MPN組15例、緩解后AML組16例、對(duì)照組17例)的LSD1蛋白表達(dá)量與EZH2蛋白表達(dá)量做相關(guān)分析。LSD1蛋白表達(dá)與EZH2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.910,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。結(jié)論:1初治髓系腫瘤患者與對(duì)照組LSD1 m RNA的表達(dá)水平無(wú)明顯差異,但初治髓系腫瘤患者LSD1蛋白表達(dá)水平高于對(duì)照組,提示LSD1可能參與髓系腫瘤的發(fā)病。2初治髓系腫瘤患者EZH2蛋白表達(dá)水平高于對(duì)照組。3緩解后AML患者LSD1蛋白及EZH2蛋白表達(dá)水平與初治AML患者相比均呈下降趨勢(shì)。4初治髓系腫瘤患者存在LSD1蛋白與EZH2蛋白表達(dá)失衡,且兩者之間具有一定相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733
【圖文】：

高危MDS組與中低危MDS組LSD1蛋白的表達(dá)水平Fig.2TheexpressionlevelofLSD1proteininBM-MNCsofhigh-riskMDS

附 圖LSD1 蛋白表達(dá)水平圖.1 各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 LSD1 蛋白的表達(dá)水平Fig.1 The expression level of LSD1 protein in BM-MNCs of each test groupand control groupLSD1 蛋白表達(dá)水平圖.2 高危 MDS 組與中低危 MDS 組 LSD1 蛋白的表達(dá)水平Fig.2 The expression level of LSD1 protein in BM-MNCs of high-risk MDSgroup and low-risk MDS group

高危MDS組與中低危MDS組EZH2蛋白的表達(dá)水平Fig.4TheexpressionlevelofEZH2proteininBM-MNCsofhigh-riskMDS

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10 胡睿;讓精準(zhǔn)治療在腫瘤領(lǐng)域落地開(kāi)花[N];健康報(bào);2019年

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1 沈奇驄;表觀酶Tet2促進(jìn)感染誘導(dǎo)髓系發(fā)生及其轉(zhuǎn)錄后機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 侯宇;髓系抑制細(xì)胞異常及網(wǎng)織血小板增多在ITP中的機(jī)制和診斷研究[D];山東大學(xué);2018年

3 張潔;LSD1對(duì)斑馬魚(yú)發(fā)育的影響及其機(jī)制的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

4 王敏;LSD1介導(dǎo)前列腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2016年

5 丁杰;LSD1對(duì)結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及其機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2013年

6 沈宏杰;BMI1在骨髓增生異常綜合征和慢性髓細(xì)胞白血病髓系進(jìn)展中的作用機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

7 胡鑫;LSD1表觀遺傳修飾對(duì)TAL1功能和機(jī)體造血調(diào)控機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2009年

8 譚理;組蛋白脫甲基酶LSD1在小鼠胚胎干細(xì)胞分化及斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 雷增杰;組蛋白去甲基化酶LSD1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞“干性”和侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 陳德紅;LSD1在前列腺癌雄激素非依賴性表型轉(zhuǎn)化中的作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王帆;髓系腫瘤患者LSD1基因及蛋白表達(dá)的臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

2 侯月蘭;大腸桿菌嚴(yán)重感染引起斑馬魚(yú)幼魚(yú)髓系應(yīng)急造血機(jī)制的研究[D];西南大學(xué);2016年

3 董振坤;97例髓系肉瘤臨床特征及預(yù)后因素分析[D];鄭州大學(xué);2019年

4 謝潔瓊;髓系腫瘤骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)和遺傳學(xué)特性的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2018年

5 李希茜;髓系腫瘤中NKD2基因表達(dá)及啟動(dòng)子甲基化態(tài)勢(shì)的臨床研究[D];江蘇大學(xué);2018年

6 張婷娟;髓系腫瘤中長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19表達(dá)的臨床意義及生物學(xué)功能研究[D];江蘇大學(xué);2017年

7 談銀生;CD14+HLA-DRlow/-髓系來(lái)源抑制性細(xì)胞在Graves病中的檢測(cè)及臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

8 侯高超;組蛋白去甲基化酶LSD1在直腸癌干性維持中的調(diào)控作用[D];河南科技大學(xué);2019年

9 索鳳至;LSD1小分子抑制劑篩選方法的建立及其抑制劑的篩選和抗腫瘤活性研究[D];鄭州大學(xué);2019年

10 吳嫣然;2',3'-二氫螺[環(huán)丙烷-1,1'-茚]-2-胺類LSD1抑制劑的合成與構(gòu)效關(guān)系研究[D];華東師范大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2754700