本文關鍵詞：髓母細胞瘤中腦腫瘤干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的:長期以來,腦腫瘤等實體腫瘤中是否存在腫瘤干細胞一直存在爭論,最近已經有報道從膠質瘤和髓母細胞瘤等腦腫瘤及其它系統(tǒng)實體腫瘤中成功分離出腫瘤干細胞。本研究旨在利用簡化的無血清培養(yǎng)基和懸浮培養(yǎng)方法,從人髓母細胞瘤中分離培養(yǎng)腦腫瘤干細胞,觀察其在體外的增殖、分化,鑒定其特異性標志物CD133和Nestin的表達,驗證腫瘤組織切片中CD133陽性細胞的存在,為腦腫瘤干細胞的進一步研究打下基礎。方法:術中取11例患者髓母細胞瘤組織,分離成單細胞懸液,接種于含表皮生長因子、成纖維生長因子以及B27添加劑的無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng),以分離其中的腦腫瘤干細胞;對其增殖形成的腦腫瘤干細胞球連續(xù)傳代培養(yǎng);并進行單克隆形成實驗,以確定原代腫瘤組織中腫瘤干細胞的百分率,觀察腦腫瘤干細胞球的形成過程。然后,將腦腫瘤干細胞球接種于含血清培養(yǎng)基,觀察腦腫瘤干細胞的分化現(xiàn)象。最后,利用免疫熒光法檢測腦腫瘤干細胞特異性標志物CD133和Nestin在腦腫瘤干細胞球中的表達;利用免疫組化法檢測組織切片中CD133陽性細胞的分布,并計算CD133陽性細胞百分率。結果:本組11例髓母細胞瘤中均僅有少數(shù)腫瘤細胞能夠在無血清培養(yǎng)基中存活并懸浮生長、增殖形成克隆性腦腫瘤干細胞球,傳代后腦腫瘤干細胞仍保持很強的自我更新和增殖能力。單克隆形成實驗表明原代腫瘤細胞中具有單克隆形成能力的腫瘤干細胞百分率為(31.18±6.18)%。在含血清培養(yǎng)基中腦腫瘤干細胞發(fā)生貼壁分化,產生具有多種細胞形態(tài)的分化細胞。腦腫瘤干細胞表達神經干細胞的特異性標志物CD133和Nestin;腫瘤組織切片中CD133陽性細胞呈巢狀或散在分布,占全部腫瘤細胞的(33.06±8.57)%。結論:人髓母細胞瘤組織中存在一定量的具有自我更新和增殖能力、表達CD133和Nestin的腦腫瘤干細胞,并能在體外將其分離、培養(yǎng)和誘導分化。
【作者單位】： 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科 中南大學湘雅醫(yī)院神經外科
【關鍵詞】： 髓母細胞瘤 腫瘤干細胞 細胞培養(yǎng) 細胞分化 CD Nestin
【基金】：湖南省自然科學基金項目(No.055JJ30060) 湖南省科技廳重點資助項目(No.02JTY2009) 湖南省衛(wèi)生廳科研基金課題(No.B2003-016)~~
【分類號】：R739.4
【正文快照】： 髓母細胞瘤是高度惡性的神經上皮組織腫瘤,是兒童最常見的惡性腫瘤之一。盡管對髓母細胞瘤和其它神經上皮來源腦腫瘤的基礎研究取得了很大進展,但它們的發(fā)生與起源一直存在爭議,治療效果仍不令人滿意[1]。隨著人體組織干細胞研究的日益深入,在白血病和造血干細胞相關研究的啟

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本文編號：274577