發(fā)布時間：2020-07-04 07:20

【摘要】：目的:檢測乳腺癌患者血漿中長鏈非編碼RNA(lncRNA)肺腺癌轉移相關轉錄本1(MALAT1)的表達變化,并探討其臨床意義。方法:應用實時熒光定量PCR方法評估MALAT1各區(qū)域片段在10名健康人血漿中的表達,并檢測102例術前、64例術后乳腺癌患者、47例良性乳腺腫瘤患者以及50例健康對照者血漿中內參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)和MALAT1的表達水平。分析GAPDH的表達與正常人及患者各臨床資料的關系,判斷其穩(wěn)定性。應用受試者工作特征曲線(ROC)分析MALAT1鑒別診斷乳腺癌的效能,并與CA153和CEA作比較。分析術前MALAT1的表達與患者臨床病理特征之間的關系以及比較手術前后血漿中MALAT1的表達。結果:GAPDH在女性外周血中表達穩(wěn)定,不受年齡和病理因素的影響(P0.05),可以用作本研究中血漿lncRNAs檢測的內源性參照。血漿MALAT1各片段表達有顯著差異(x 2=27.042,P0.001)。乳腺癌組術前血漿MALAT1的相對表達量5.58(2.17～12.34)較良性組 1.08(0.61～2.58)(Z=6.209,P0.001)及健康對照組1.63(0.98～3.51)(Z=4.871,P0.001)顯著增高,而良性組與健康對照組之間,差異無統(tǒng)計學意義(Z=-1.675,P=0.094)。Ⅰ-Ⅱ期乳腺癌患者術前血漿MALAT1較良性組異常高表達,差異有統(tǒng)計學意義(Z=5.593,P0.001)。術后血漿MALAT1相對表達與術前相比顯著降低(Z=-2.248,P=0.025)。ROC曲線分析結果顯示MALAT1、CA153和CEA鑒別乳腺癌患者與健康對照者曲線下面積AUC分別為0.744、0.619和0.553;敏感度分別為54.1%、60.0%、70.0%;特異度分別為86.3%、66.7%、44.1%。乳腺癌患者術前血漿MALAT1的表達與TNM分期(Z=-1.982,P =0.047)、淋巴結轉移(Z=-2.186,P =0.029)和病理分化程度(Z=-2.435,P=0.015)相關。結論:MALAT1可能是乳腺癌的潛在新分子標志物。目的:探討MALAT1參與ER陽性乳腺癌細胞增殖調控的潛在機制。方法:收集南京醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院自2017年6月至2018年1月ER陽性乳腺癌及癌旁組織標本20例,反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-qPCR)方法檢測MALAT1和miR-503-5p的表達。CCK-8及克隆形成實驗檢測轉染小干擾RNA(siRNA)/陰性對照(si-NC),miRNA/陰性對照(miRNA NC)或者毛蕊異黃酮處理后ER陽性乳腺癌細胞MCF7和T47D的增殖能力。采用熒光素酶實驗檢測miR-503-5p和MALAT1之間是否存在關聯(lián)。Western blot實驗檢測毛蕊異黃酮處理MCF7細胞后ERβ蛋白的表達。染色質免疫共沉淀Chip實驗檢測MCF7細胞中MALAT1基因啟動子區(qū)域是否存在轉錄因子ERβ結合位點。結果:MALAT1在ER陽性乳腺癌組織中高表達(P0.05)。敲低MALAT1表達顯著抑制ER陽性乳腺癌細胞增殖(P0.05)。與ER陰性乳腺癌細胞相比,毛蕊異黃酮(calycosin)抑制ER陽性細胞增殖效果更明顯(P0.05)。Chip結果表明MALAT1基因啟動子區(qū)域(-816～-562)存在轉錄因子ERβ結合位點。毛蕊異黃酮刺激MCF7細胞后顯著增加了 ER β與該區(qū)域的結合(P0.05)。miR-503-5p在ER陽性乳腺癌組織中低表達(P0.05)。過表達miR-503-5p顯著降低了 ER陽性乳腺癌細胞增殖能力(P0.05)。通過生物信息分析及后續(xù)的熒光素酶報告實驗證實MALAT1可直接綁定miR-503-5p。結論:毛蕊異黃酮可能通過ERβ-MALAT1-miR-503-5p信號通路抑制ER陽性乳腺癌細胞增殖。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

５．邋５８（２．邋１７？１２．邋３４）較良性組邋１＿邋０８（０．邋６１？２．邋５８）邋（Ｚ＝６．邋２０９，戶邋＜０．邋００１）及健康對逡逑照組１．６３邋（０．９８？３．５１）邋（Ｚ＝４．邋８７１，Ｚ３邋＜０．００１）顯著增高，而良性組與健康對照組逡逑之間，差異無統(tǒng)計學意義（Ｚ＝－ｌ．邋６７５，戶＝０．邋０９４），見圖２。Ｉ邋－ＩＩ期乳腺癌患者術前逡逑血漿ＭＡＬＡＴ１較良性組（Ｚ＝５．邋５９３，邋Ｚ３邋＜０．邋００１）和健康對照組（Ｚ＝４．邋１８３，廣＜０．邋００１）異逡逑常高表達，較ｍ－ＩＶ期患者低表達（Ｚ＝－ｌ．邋９８２，戶�。埃矗罚�。６４例乳腺癌患者術后血逡逑漿ＭＡＬＡＴ１表達２．邋０９（１．邋０８？３．邋５１）較術前３．邋９１邋（１．邋５９？１１．邋２８）顯著降低，差異有逡逑統(tǒng)計學意義（Ｚ＝－２．邋２４８，戶＝０．邋０２５）。逡逑邐ｒ邋＝０．０９４邐逡逑．＾邋＜０．００１邐．邋＜０．００１邋．逡逑８０－１邐１逡逑多邐７０－逡逑拍邐６０－邐－逡逑懈邐５０－邐、逡逑友邐４０－邐▲▲▲▲逡逑要邋３０－邐▲邐ｙ逡逑Ｔ－邐２０－邐ＡＡ＾ｔ邐▲逡逑３邐＊0－邋—邐————Ｉ邐■逡逑圖２血漿ＭＡＬＡＴ１在各組中的表達逡逑２１逡逑

型［ｌｏｇｉｔ0Ｐ）＝－0．邋９１７＋０．邋１５２ＭＡＬＡＴ１＋０．邋０６９ＣＡ１５３－０．邋０１１ＣＥＡ］預測邋ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３逡逑和ＣＥＡ聯(lián)合檢測診斷乳腺癌時的ＡＵＣ（０．邋７５４）最高，敏感度和特異度分別為６０．邋０％逡逑和８１．邋４％，見圖３和表３。逡逑，ｓ邋ｊＶ邋尸逡逑１／邋ｊ邐—邋ＭＡＬＡＴ１逡逑ｊＪ邋，ｊ－；邐—ＣＡ１５３逡逑ＣＥＡ逡逑—ＭＡＬＡＴ１＋ＣＡ１５３＋ＣＥＡ逡逑參考線逡逑邐ｉ邐ｉ邐邐ｉ邐ｉ邐逡逑０邐Ｏ－邋２邐Ｏ．邋？！邐Ｏ．邋ｅ邐Ｏ邋Ｓ邐１．０逡逑１邋－特異性逡逑圖３乳腺癌患者ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３和ＣＥＡ單獨及聯(lián)合ＲＯＣ曲線分析逡逑表３邋ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３及ＣＥＡ的單獨或聯(lián)合診斷效能逡逑敏感度邐特異度逡逑項目邐ＡＵＣ邐９５％ＣＩ邋臨界值逡逑（％）邋（％）逡逑ＭＡＬＡＴ１邐０．７４４邐０．６６２？０．８２５邐１．６９邐５４．邋１邐８６．３逡逑ＣＡ１５３邐０．６１９邐０．５２３？０．７１５邐１０．２３邐６０．０邐６６．７逡逑ＣＥＡ邐０．５５３邐０．４５６？０．６５１邐１．８１邐７０．０邐４４．邋１逡逑ＭＡＬＡＴ１＋ＣＡ１５３＋

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