【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)以人肝癌細(xì)胞株HepG2和Huh7為研究對(duì)象,通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBx基因,來研究HBx對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞前后lncRNA的差異表達(dá)譜,為合并HBV感染的肝癌患者的診斷與治療提供新的思路。方法:將體外培養(yǎng)的兩個(gè)肝癌細(xì)胞株(HepG2和Huh7)各分成3組:空白組、pcDNA3.1轉(zhuǎn)染組和pc DNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染組,通過RT-PCR技術(shù)檢測(cè)兩個(gè)肝癌細(xì)胞株中HBx mRNA的表達(dá);通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HBx對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HBx對(duì)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響,觀察轉(zhuǎn)染前后肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化;采用Illumina HiSeq?2000測(cè)序儀及DEseq2軟件檢測(cè)分析HBx轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞前后lnc RNA的差異表達(dá)譜,尋找變化的lncRNAs,并通過q RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證HBx轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞前后lncRNA mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HepG2和Huh7細(xì)胞中pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染組的侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增加;劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HepG2和Huh7細(xì)胞中pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染組的遷移距離明顯變長(zhǎng)。2.RNA測(cè)序結(jié)果顯示:HBx轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞前后差異表達(dá)的mRNA共29個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的有17個(gè),表達(dá)下調(diào)的有12個(gè);差異表達(dá)的lncRNA共10個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的有3個(gè),表達(dá)下調(diào)的有7個(gè)。3.qRT-PCR結(jié)果顯示:與pcDNA3.1組相比,pcDNA3.1-HBx組中l(wèi)nc RNA ENST00000582866.1的表達(dá)水平明顯下調(diào),lncRNA ENST00000607259.1和lncRNA ENST00000513358.3的表達(dá)水平明顯上調(diào)。結(jié)論:1.轉(zhuǎn)染HBx基因可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。2.瞬轉(zhuǎn)HBx的肝癌細(xì)胞lncRNA表達(dá)譜差異分析,mRNA和lncRNA表達(dá)差異基因分別為29個(gè)、10個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的分別為17個(gè)、3個(gè),表達(dá)下調(diào)的分別為12個(gè)、7個(gè)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后 Transwell 實(shí)驗(yàn)鏡下照片（200×）；B. HTranswell 實(shí)驗(yàn)侵襲細(xì)胞數(shù)直方圖uh7 細(xì)胞：空白組侵襲細(xì)胞數(shù)為 60.60±6.35，pcD37，pcDNA3.1-HBx 轉(zhuǎn)染組為 130.60±10.31。pcDNA3.1

AHuh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后Transwell實(shí)驗(yàn)鏡下照片（200×）；B.Huh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后Transwell實(shí)驗(yàn)侵襲細(xì)胞數(shù)直方圖

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 Ming Geng;Xuan Xin;Li-Quan Bi;Lu-Ting Zhou;Xiao-Hong Liu;;Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

2 Ting-Ting Yu;Xi-Ming Xu;Yi Hu;Jun-Jian Deng;Wei Ge;Na-Na Han;Mei-Xia Zhang;;Long noncoding RNAs in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年23期

3 Mirko Tarocchi;Simone Polvani;Giada Marroncini;Andrea Galli;;Molecular mechanism of hepatitis B virus-induced hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

4 楊世忠;張愛群;陳耿;張雷達(dá);朱瑾;李曉武;董家鴻;;乙型肝炎病毒X蛋白誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞上皮-間葉樣表型轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2010年12期

本文編號(hào)：2740582