【摘要】：目的:本實驗以人肝癌細胞株HepG2和Huh7為研究對象,通過瞬時轉染HBx基因,來研究HBx對肝癌細胞侵襲轉移能力的影響及轉染肝癌細胞前后lncRNA的差異表達譜,為合并HBV感染的肝癌患者的診斷與治療提供新的思路。方法:將體外培養(yǎng)的兩個肝癌細胞株(HepG2和Huh7)各分成3組:空白組、pcDNA3.1轉染組和pc DNA3.1-HBx轉染組,通過RT-PCR技術檢測兩個肝癌細胞株中HBx mRNA的表達;通過Transwell實驗檢測HBx對肝癌細胞侵襲能力的影響和劃痕實驗檢測HBx對肝癌細胞轉移能力的影響,觀察轉染前后肝癌細胞侵襲轉移能力的變化;采用Illumina HiSeq?2000測序儀及DEseq2軟件檢測分析HBx轉染HepG2細胞前后lnc RNA的差異表達譜,尋找變化的lncRNAs,并通過q RT-PCR技術驗證HBx轉染HepG2細胞前后lncRNA mRNA的表達水平。結果:1.Transwell實驗結果顯示HepG2和Huh7細胞中pcDNA3.1-HBx轉染組的侵襲細胞數(shù)明顯增加;劃痕實驗結果顯示HepG2和Huh7細胞中pcDNA3.1-HBx轉染組的遷移距離明顯變長。2.RNA測序結果顯示:HBx轉染HepG2細胞前后差異表達的mRNA共29個,其中表達上調的有17個,表達下調的有12個;差異表達的lncRNA共10個,其中表達上調的有3個,表達下調的有7個。3.qRT-PCR結果顯示:與pcDNA3.1組相比,pcDNA3.1-HBx組中l(wèi)nc RNA ENST00000582866.1的表達水平明顯下調,lncRNA ENST00000607259.1和lncRNA ENST00000513358.3的表達水平明顯上調。結論:1.轉染HBx基因可導致轉染后肝癌細胞的侵襲轉移能力增強。2.瞬轉HBx的肝癌細胞lncRNA表達譜差異分析,mRNA和lncRNA表達差異基因分別為29個、10個,其中表達上調的分別為17個、3個,表達下調的分別為12個、7個。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

HepG2 細胞轉染前后 Transwell 實驗鏡下照片（200×）；B. HTranswell 實驗侵襲細胞數(shù)直方圖uh7 細胞：空白組侵襲細胞數(shù)為 60.60±6.35，pcD37，pcDNA3.1-HBx 轉染組為 130.60±10.31。pcDNA3.1

AHuh7細胞轉染前后Transwell實驗鏡下照片（200×）；B.Huh7細胞轉染前后Transwell實驗侵襲細胞數(shù)直方圖

【參考文獻】

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1 Ming Geng;Xuan Xin;Li-Quan Bi;Lu-Ting Zhou;Xiao-Hong Liu;;Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

2 Ting-Ting Yu;Xi-Ming Xu;Yi Hu;Jun-Jian Deng;Wei Ge;Na-Na Han;Mei-Xia Zhang;;Long noncoding RNAs in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年23期

3 Mirko Tarocchi;Simone Polvani;Giada Marroncini;Andrea Galli;;Molecular mechanism of hepatitis B virus-induced hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

4 楊世忠;張愛群;陳耿;張雷達;朱瑾;李曉武;董家鴻;;乙型肝炎病毒X蛋白誘導肝癌細胞上皮-間葉樣表型轉化的實驗觀察[J];中華醫(yī)學雜志;2010年12期

本文編號：2740582