【摘要】：目的 TIM-3分子有多個配體,各個配體與TIM-3的生物學功能之間的關(guān)系尚存爭議。我們對已獲得的抗人T細胞免疫球蛋白和粘蛋白-3(TIM-3)單克隆抗體(mAb)4E8及9H7進行體外生物學功能研究,借以闡述TIM-3抗體的體外免疫增強功能與其可否與特定TIM-3配體競爭結(jié)合是否存在相關(guān)性,從而為深入研究TIM-3抗體靶向TIM-3分子的作用機制及靶向TIM-3分子的腫瘤免疫治療提供實驗基礎(chǔ)及科學依據(jù)。方法 采用細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)獲得表達人TIM-3分子的細胞系L929-human TIM-3,間接免疫熒光染色及流式細胞術(shù)檢測抗人TIM-3 mAb 4E8及9H7與人TIM-3分子結(jié)合的能力;同時,ELISA檢測4E8阻斷人TIM-3融合蛋白(TIM-3 Ig-hu Fc)與半乳糖凝集素-9(galectin-9,Gal-9)結(jié)合的能力;流式細胞術(shù)檢測4E8或9H7阻斷TIM-3 Ig-huFc與293T-CEACAM-1瞬時表達細胞表面癌胚抗原相關(guān)黏附分子1(CEACAM-1)結(jié)合的能力及4E8或9H7阻斷TIM-3 Ig-huFc與凋亡細胞表面TIM-3配體磷脂酰絲氨酸(PtdSer)結(jié)合的能力;混合淋巴細胞反應(MLR)及ELISA檢測TIM-3 m Ab 4E8及9H7對CD4~+T細胞分泌白介素-2(IL-2)及干擾素-γ(IFN-γ)的影響。結(jié)果 通過對穩(wěn)定表達人TIM-3分子的細胞L929-human TIM-3的間接免疫熒光染色,驗證了4E8及9H7均可與人TIM-3分子特異性結(jié)合。Gal-9與TIM-3結(jié)合實驗結(jié)果顯示,4E8可阻斷TIM-3與Gal-9的結(jié)合。但CEACAM-1或Ptd Ser與TIM-3結(jié)合實驗結(jié)果顯示,4E8不可阻斷TIM-3與CEACAM-1或PtdSer的結(jié)合而9H7既可阻斷TIM-3與CEACAM-1的結(jié)合又可阻斷TIM-3與PtdSer的結(jié)合。MLR實驗結(jié)果顯示,4E8及9H7均可增強CD4~+T細胞分泌IL-2的能力,且與PD-1抗體nivolumab有協(xié)同作用,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。此外,4E8及9H7均可增強CD4~+T細胞分泌IFN-γ的能力,且4E8與PD-1抗體nivolumab具有顯著的協(xié)同效果,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論 本項研究發(fā)現(xiàn)TIM-3 mAb 4E8可阻斷TIM-3與Gal-9的結(jié)合,不可阻斷TIM-3與CEACAM-1或PtdSer結(jié)合。此外,4E8具有增強CD4~+T細胞分泌IL-2及IFN-γ的能力且與PD-1 mAb具有協(xié)同效果,但4E8對CD4~+T細胞的作用不依賴于阻斷TIM-3與其配體CEACAM-1或PtdSer的結(jié)合。TIM-3 mAb 9H7可阻斷TIM-3與CEACAM-1及PtdSer的結(jié)合,具有增強CD4~+T細胞分泌IL-2作用且與PD-1 mAb具有協(xié)同效果。同時也可增強CD4~+T細胞分泌IFN-γ的能力。以上數(shù)據(jù)表明,TIM-3抗體的體外免疫增強功能與是否競爭特定TIM3配體結(jié)合不存在相關(guān)性。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R730.51

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 吉們;陳迪康;卞建葉;夏瑞;宋心雨;文雯;張學光;朱一蓓;;TIM-3在人非小細胞肺癌CD4~+腫瘤浸潤淋巴細胞的表達增強提示預后不良[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年06期

2 李

本文編號：2721305