【摘要】：目的 TIM-3分子有多個(gè)配體,各個(gè)配體與TIM-3的生物學(xué)功能之間的關(guān)系尚存爭(zhēng)議。我們對(duì)已獲得的抗人T細(xì)胞免疫球蛋白和粘蛋白-3(TIM-3)單克隆抗體(mAb)4E8及9H7進(jìn)行體外生物學(xué)功能研究,借以闡述TIM-3抗體的體外免疫增強(qiáng)功能與其可否與特定TIM-3配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合是否存在相關(guān)性,從而為深入研究TIM-3抗體靶向TIM-3分子的作用機(jī)制及靶向TIM-3分子的腫瘤免疫治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及科學(xué)依據(jù)。方法 采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)獲得表達(dá)人TIM-3分子的細(xì)胞系L929-human TIM-3,間接免疫熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗人TIM-3 mAb 4E8及9H7與人TIM-3分子結(jié)合的能力;同時(shí),ELISA檢測(cè)4E8阻斷人TIM-3融合蛋白(TIM-3 Ig-hu Fc)與半乳糖凝集素-9(galectin-9,Gal-9)結(jié)合的能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4E8或9H7阻斷TIM-3 Ig-huFc與293T-CEACAM-1瞬時(shí)表達(dá)細(xì)胞表面癌胚抗原相關(guān)黏附分子1(CEACAM-1)結(jié)合的能力及4E8或9H7阻斷TIM-3 Ig-huFc與凋亡細(xì)胞表面TIM-3配體磷脂酰絲氨酸(PtdSer)結(jié)合的能力;混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)及ELISA檢測(cè)TIM-3 m Ab 4E8及9H7對(duì)CD4~+T細(xì)胞分泌白介素-2(IL-2)及干擾素-γ(IFN-γ)的影響。結(jié)果 通過(guò)對(duì)穩(wěn)定表達(dá)人TIM-3分子的細(xì)胞L929-human TIM-3的間接免疫熒光染色,驗(yàn)證了4E8及9H7均可與人TIM-3分子特異性結(jié)合。Gal-9與TIM-3結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4E8可阻斷TIM-3與Gal-9的結(jié)合。但CEACAM-1或Ptd Ser與TIM-3結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4E8不可阻斷TIM-3與CEACAM-1或PtdSer的結(jié)合而9H7既可阻斷TIM-3與CEACAM-1的結(jié)合又可阻斷TIM-3與PtdSer的結(jié)合。MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4E8及9H7均可增強(qiáng)CD4~+T細(xì)胞分泌IL-2的能力,且與PD-1抗體nivolumab有協(xié)同作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。此外,4E8及9H7均可增強(qiáng)CD4~+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力,且4E8與PD-1抗體nivolumab具有顯著的協(xié)同效果,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 本項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)TIM-3 mAb 4E8可阻斷TIM-3與Gal-9的結(jié)合,不可阻斷TIM-3與CEACAM-1或PtdSer結(jié)合。此外,4E8具有增強(qiáng)CD4~+T細(xì)胞分泌IL-2及IFN-γ的能力且與PD-1 mAb具有協(xié)同效果,但4E8對(duì)CD4~+T細(xì)胞的作用不依賴于阻斷TIM-3與其配體CEACAM-1或PtdSer的結(jié)合。TIM-3 mAb 9H7可阻斷TIM-3與CEACAM-1及PtdSer的結(jié)合,具有增強(qiáng)CD4~+T細(xì)胞分泌IL-2作用且與PD-1 mAb具有協(xié)同效果。同時(shí)也可增強(qiáng)CD4~+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力。以上數(shù)據(jù)表明,TIM-3抗體的體外免疫增強(qiáng)功能與是否競(jìng)爭(zhēng)特定TIM3配體結(jié)合不存在相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.51

【參考文獻(xiàn)】

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1 吉們;陳迪康;卞建葉;夏瑞;宋心雨;文雯;張學(xué)光;朱一蓓;;TIM-3在人非小細(xì)胞肺癌CD4~+腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的表達(dá)增強(qiáng)提示預(yù)后不良[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2015年06期

2 李

本文編號(hào)：2721305