本文關(guān)鍵詞：卟啉光動(dòng)力納米藥物制備及腫瘤抑制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的： 化療是惡性腫瘤治療的主要手段之一。但傳統(tǒng)化療藥物缺乏腫瘤選擇性,毒副作用大,并且長期用藥導(dǎo)致腫瘤多藥耐藥,是造成化療失敗的重要原因。目前,肝癌患者尚沒有化療方案顯示出生存獲益,因?yàn)楦伟┗颊咂毡閷熅哂心退幮?對化療不敏感。 光動(dòng)力療法是近年來一種新興的腫瘤治療方案。光敏藥物進(jìn)入體內(nèi),富集于病灶后,在匹配吸收波長的激光作用下,能生成活性很強(qiáng)的單態(tài)氧,產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用。但由于光敏劑水溶性較差,臨床上很難直接注射；此外,光敏劑穩(wěn)定性較差,很難在腫瘤部位長久富集,因此光動(dòng)力治療目前在臨床只是做為輔助治療方案。 雖然這些治療手段在目前的腫瘤治療上發(fā)揮了重要的作用,但仍存在自身的弊端和無法完全抑制腫瘤的缺點(diǎn),因此發(fā)展兩種或多種腫瘤治療手段協(xié)同作用的聯(lián)合治療方法,成為腫瘤治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。多功能納米載體能夠?qū)崿F(xiàn)多種功能如長循環(huán)、靶向以及不同作用機(jī)制治療方法的有效整合,滿足臨床對腫瘤聯(lián)合治療的需求。 目前,已有大量關(guān)于多功能納米藥物對腫瘤聯(lián)合治療的報(bào)導(dǎo),但由于其生物相容性及生物可降解性等方面的局限,極大的限制了在臨床上的應(yīng)用。本文擬設(shè)計(jì)并構(gòu)建以生物體自有分子--血卟啉為基礎(chǔ)的可直接用于臨床注射的腫瘤靶向納米藥物,聯(lián)合光動(dòng)力學(xué)治療與化療,考察其逆轉(zhuǎn)耐藥乳腺癌細(xì)胞ADR/MCF-7化療耐藥的作用和相關(guān)分子機(jī)制,及在耐藥乳腺癌、肝癌裸鼠荷瘤模型中的腫瘤靶向和體內(nèi)抑瘤效果。 研究方法： 1)運(yùn)用聚乙二醇修飾血卟啉合成光動(dòng)力納米材料HPP,負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素制成光動(dòng)力納米藥物HPPD。利用核磁共振分析納米微粒的結(jié)構(gòu),透射電子顯微鏡及動(dòng)態(tài)光散射研究其形貌及粒徑。高效液相色譜分析檢測藥物的體外釋放行為。 2)運(yùn)用MTT法檢測游離藥物組Dox,納米藥物組HPPD及聯(lián)合光動(dòng)力療法處理組HPPD, ADR/MCF-7細(xì)胞中藥物半數(shù)抑制濃度和細(xì)胞增殖能力的變化。流式細(xì)胞術(shù)定量檢測不同處理組細(xì)胞對藥物的攝取。激光共聚焦觀察藥物在耐藥乳腺癌及親本細(xì)胞中的藥物分布和亞細(xì)胞定位。 3)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。激光共聚焦檢測細(xì)胞色素c的亞細(xì)胞定位,Western blot檢測線粒體凋亡通路關(guān)鍵成員的蛋白表達(dá)變化。 4)建立耐藥乳腺癌、肝癌裸鼠皮下模型及狨猴肝癌原位模型,Cy5.5熒光標(biāo)記納米藥物HPPD,活體動(dòng)物成像考察其腫瘤靶向性。 5)尾靜脈注射游離藥物Dox或納米藥物HPPD,繪制腫瘤生長曲線,考察體內(nèi)抑瘤效果。HE染色檢測HPPD的生物安全性；HPLC檢測藥物在各組織臟器的分布；血清生化檢測分析不同處理組阿霉素的心臟毒性。 結(jié)果： 1)核磁譜圖結(jié)合透射電子顯微鏡結(jié)果表明,聚乙二醇通過酰胺鍵與血卟啉偶聯(lián)形成具有核殼結(jié)構(gòu)的光動(dòng)力納米膠束HPP,外形為球形或接近球形,粒徑為24.38±1.02nm。HPP能夠高效負(fù)載阿霉素,載藥納米微粒HPPD的粒徑為35.60±2.05nm,體外釋放結(jié)果表明藥物具有顯著的pH敏感釋放特性,并且結(jié)合光照后,藥物在弱酸性環(huán)境中的釋放速率進(jìn)一步加快。 2)和游離阿霉素相比,HPPD結(jié)合光照治療組對阿霉素耐藥的人乳腺癌細(xì)胞(ADR/MCF-7)生長的抑制作用顯著增加,有效逆轉(zhuǎn)了細(xì)胞的耐藥性,逆轉(zhuǎn)指數(shù)高達(dá)12。 3)激光共聚焦觀察表明,游離阿霉素主要分布于ADR/MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞漿；HPPD可實(shí)現(xiàn)阿霉素由胞漿到胞核的轉(zhuǎn)位,結(jié)合光照治療后,藥物在胞核中的分布進(jìn)一步增加。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果進(jìn)一步證明,聯(lián)合治療法有效增加了耐藥細(xì)胞對阿霉素的攝取。 4)流式細(xì)胞術(shù)分析表明HPPD結(jié)合光照治療顯著誘導(dǎo)了耐藥細(xì)胞的凋亡。激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素c從線粒體釋放到胞質(zhì)中,Western blot結(jié)果表明細(xì)胞漿中細(xì)胞色素c和凋亡誘導(dǎo)因子表達(dá)明顯升高。 5)皮下接種ADR/MCF-7細(xì)胞,構(gòu)建異位移植瘤裸鼠模型,尾靜脈給藥,結(jié)果顯示游離的阿霉素或HPP結(jié)合光照后不能顯著抑制腫瘤的體內(nèi)生長；而HPPD治療裸鼠三周后,實(shí)現(xiàn)了腫瘤的完全消除,結(jié)合光照后,兩周即可完全抑制腫瘤生長。此外,HPPD對于肝癌皮下模型也具有很好的腫瘤抑制效果。 6) HPPD具有較好的體內(nèi)腫瘤靶向性。ADR/MCF-7皮下成瘤裸鼠尾靜脈注射給藥后2h后,HPPD主要富集于腫瘤組織和腎臟；24h后,只在腫瘤部位觀測到較強(qiáng)的熒光信號(hào),表明HPPD有很好的腫瘤滯留性。此外MHCC-97H肝癌皮下成瘤裸鼠以及DENA藥物誘導(dǎo)的肝癌原位模型狨猴體內(nèi)也觀察到類似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 7)尾靜脈注射游離阿霉素和HPPD24h后,用HPLC考察藥物在裸鼠體內(nèi)分布。相對于游離藥物組,HPPD在腫瘤內(nèi)的藥物分布提高至2-3倍,心臟分布降低了約55%。HPPD能顯著降低阿霉素的毒性。在耐藥乳腺癌和肝癌皮下荷瘤模型中,相對于游離藥物組,心肌磷酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)表達(dá)明顯降低；HE結(jié)果表明,HPPD處理組對裸鼠的組織臟器沒有毒性；血清生化試驗(yàn)表明,HPPD可有效減少阿霉素的心臟毒性。 結(jié)論： 本文設(shè)計(jì)并構(gòu)建了一種結(jié)構(gòu)簡單、生物安全的基于生物體自有材料--血卟啉的納米藥物HPPD,實(shí)現(xiàn)了納米體系內(nèi)光敏劑與化療藥物的有效整合,體內(nèi)的腫瘤靶向遞送,以及化療和光動(dòng)力療法的協(xié)同作用,為臨床腫瘤聯(lián)合治療提供了新的思路與策略。
【關(guān)鍵詞】：卟啉 阿霉素 光動(dòng)力療法 腫瘤靶向 化療增敏
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號(hào)說明13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、以卟啉為基礎(chǔ)的光動(dòng)力納米藥物的制備及表征18-31
• 1.1 對象和方法18-21
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器19
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 1.2 結(jié)果21-24
• 1.2.1 卟啉光動(dòng)力納米微粒的結(jié)構(gòu)表征與分析21-22
• 1.2.2 卟啉光動(dòng)力納米藥物的結(jié)構(gòu)表征與分析22-24
• 1.2.3 卟啉光動(dòng)力納米藥物的體外藥物釋放行為24
• 1.3 討論24-30
• 1.4 小結(jié)30-31
• 二、卟啉光動(dòng)力納米藥物逆轉(zhuǎn)化療耐藥的研究31-54
• 2.1 對象和方法31-40
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料31-34
• 2.1.2 研究方法34-39
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39-40
• 2.2 結(jié)果40-47
• 2.2.1 藥物半數(shù)抑制濃度的分析40-41
• 2.2.2 細(xì)胞增殖活性分析41-42
• 2.2.3 HPPD結(jié)合光照顯著增加MCF-7/ADR細(xì)胞對藥物的攝取42-43
• 2.2.4 納米藥物結(jié)合光動(dòng)力療法能促進(jìn)阿霉素進(jìn)入ADR/MCF-7細(xì)胞的胞核43-44
• 2.2.5 HPPD結(jié)合光動(dòng)力療法顯著誘導(dǎo)了ADR/MCF-7細(xì)胞的凋亡44-45
• 2.2.6 卟啉納米藥物結(jié)合光動(dòng)力療法可激活線粒體凋亡途徑45-47
• 2.3 討論47-53
• 2.4 小結(jié)53-54
• 三、卟啉光動(dòng)力納米藥物的體內(nèi)評(píng)價(jià)54-71
• 3.1 對象和方法54-56
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料54
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器54
• 3.1.3 研究方法54-56
• 3.2 結(jié)果56-62
• 3.2.1 腫瘤體內(nèi)生長情況56-58
• 3.2.2 HE檢測腫瘤組織病理學(xué)改變58
• 3.2.3 血清生化檢測分析藥物心臟毒性58-59
• 3.2.4 HPPD腫瘤靶向性分析59-61
• 3.2.5 HPPD的藥物組織分布61-62
• 3.3 討論62-70
• 3.4 小結(jié)70-71
• 全文結(jié)論71-72
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)72-73
• 參考文獻(xiàn)73-82
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明82-83
• 附錄83-92
• 綜述92-105
• 綜述參考文獻(xiàn)100-105
• 致謝105

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Evangelos KONTARGIRIS,Evangelos KOLETTAS,Athina VADALOUCA,Ioannis P. TROUGAKOS,Efstathios S. GONOS,Vasiliki KALFAKAKOU;Ectopic expression of clusterin/apolipoprotein J or Bcl-2 decreases the sensitivity of HaCaT cells to toxic effects of ropivacaine[J];Cell Research;2004年05期

  本文關(guān)鍵詞：卟啉光動(dòng)力納米藥物制備及腫瘤抑制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：271823