【摘要】：肝癌(HCC)在中國的發(fā)病率居所有惡性腫瘤的第四位,其死亡率高達第二位。因此,肝癌的預(yù)防和治療尤為重要。視黃酸受體(RARγ)作為核受體超家族中的一員,其在介導(dǎo)細胞增殖、分化、凋亡、周期調(diào)控等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用。RARγ作為一個促癌因子在肝癌中是高度表達的,這種促癌作用不依賴于對其轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)而是依賴于其非基因型功能。RARγ的非基因型功能有望成為癌癥治療的一個新的策略。在此,我們希望可以找到調(diào)控RARγ的化合物進一步研究其非基因型抗癌機制。通過MTT、流式、克隆形成、細胞劃痕、免疫熒光等實驗,發(fā)現(xiàn)氮雜吲哚類化合物GJ-51802和GJ-51805具有很好的抗腫瘤效果。GJ-51802和GJ-51805可以抑制肝癌細胞的增殖:GJ-51802和GJ-51805的IC50分別是7.5μM和2.5 μ。GJ-51802和GJ-51805可以抑制肝癌細胞的遷移,下調(diào)遷移標(biāo)志物MMP2的表達水平。兩個化合物在一定程度上引起細胞的早期凋亡和晚期凋亡:誘導(dǎo)PARP切割,激活Bax促凋亡蛋白。另外,GJ-51802和GJ-51805顯著阻滯細胞周期于G2/M期,下調(diào)CDK1的表達。我們猜想,這可能與肝癌中高度表達的RARy有關(guān)。經(jīng)檢測,GJ-51802和GJ-51805可以以濃度依賴性和時間依賴性的方式下調(diào)RARγ。通過報告基因及蛋白水解策略,發(fā)現(xiàn)RARγ可能是GJ-51805的潛在靶點。CO-IP實驗證明,GJ-51805可以破壞RARy和CDK1的相互作用,免疫熒光實驗證明RARγ和CDK1存在共定位現(xiàn)象。因此,此論文通過篩選,得到具有抗腫瘤活性的氮雜吲哚類化合物GJ-51805,其可以顯著阻滯細胞周期于G2/M期,調(diào)節(jié)RARγ并破壞RARγ和CDK1的相互作用。這可能是其發(fā)揮抗癌作用的機制。
【圖文】：

第二種受體均可以與視黃素Ｘ受體形成異源二聚體，如甲狀腺激素受體；第三逡逑種則是孤兒核受體［９］。逡逑經(jīng)研究證明核受體是由六個部分構(gòu)成（如圖１）邋［１＜）１，從Ｎ端到Ｃ端分別使逡逑用了前６個英文字母來表示。其中在Ａ／Ｂ區(qū)域的序列、長度和結(jié)構(gòu)屬于多變區(qū)，逡逑Ａ／Ｂ中含有（轉(zhuǎn)錄活化區(qū)）ＡＦ１，該區(qū)能夠和多種轉(zhuǎn)錄因子產(chǎn)生相互作用而激活逡逑目標(biāo)基因。Ｃ區(qū)有兩個鋅指結(jié)構(gòu)，是結(jié)構(gòu)上較為保守的部分，為ＤＮＡ的結(jié)合區(qū)。逡逑Ｄ區(qū)能夠使核受體蛋白發(fā)生構(gòu)型的改變，屬于一個比較多變的鉸鏈區(qū)，核定位信逡逑號多出現(xiàn)于這一區(qū)域。Ｅ區(qū)占據(jù)了整個核受體的大部分空間，因此它也具有相對逡逑復(fù)雜的功能，比如它可以作為激素的結(jié)合區(qū)，該區(qū)域也被叫做（轉(zhuǎn)錄活化區(qū)）ＡＦ２。逡逑在核受體的Ｃ末端Ｆ區(qū)構(gòu)成多變，具體的功能在該區(qū)域目前并未發(fā)現(xiàn)。機體的逡逑激素變化能夠影響核受體所處的狀態(tài)［１（）］。逡逑ＤＮＡ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ邐Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ邋Ｄｏｍａｉｎ逡逑邐ＡＦ－１邐Ｄｏｍａｉｎ邋＜ＤＢＤ）邐Ｌｉｇａｎｄ邋Ｂｉｎｄｉｎｇ邋Ｄｏｍａｉｎ邋（ＬＢＤ）邋ＡＦ－２逡逑Ｎ－｜邋—邋Ａ／Ｂ邐Ｉ邋Ｃ邋—Ｅ邋…邐Ｉ邋Ｆ邋卜。逡逑圖１．核受體結(jié)構(gòu)域示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ：邐Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｎｕｃｌｅａｒ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑摘自：Ｍｃｅｗａｎ

ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１。按照上述濃度梯度相同條件下處理后，通過ＭＴＴ進行檢測。發(fā)逡逑現(xiàn)，ＧＪ－５１８０２－ＨＣ１的ＩＣ５Ｇ在３邋［ｉＭ左右。因此，，我們初步推測，ＧＪ－５１８０２的活逡逑性低于ＧＪ－５１８０５的原因可能是其溶解度低于ＧＪ－５１８０５的溶解度（圖２Ｃ）。逡逑在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１這兩株肝癌細胞中，我們做了克隆形成實驗。逡逑ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５的加藥濃度分別是０．５邋ｐＭ、１邋ｐＭ和０．１邋ｎＭ和０．２邋ｎＭ，經(jīng)逡逑過１％的血清加藥處理１５天后，細胞已經(jīng)長成克隆。我們可以很清楚的觀察到，逡逑在這兩株肝癌細胞中ＧＪ－５１８０２和ＧＪ－５１８０５均可以很好地抑制腫瘤細胞的增殖逡逑（圖邋２Ｄ，圖邋２Ｅ）。逡逑３２逡逑
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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1 劉瀚e

本文編號：2674001