【摘要】：背景與目的:多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致乳腺癌治療失敗的兩大重要因素。乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的過度表達(dá)和/或外排功能增強(qiáng)是MDR產(chǎn)生的主要原因之一。具有MDR的乳腺癌細(xì)胞存在更強(qiáng)的遷移/侵襲能力。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)與乳腺癌的發(fā)展密切相關(guān),在MDR、遷移、侵襲和干細(xì)胞特性方面尤為明顯。細(xì)胞角蛋白18(Cytokeratin18,CK18)表達(dá)下調(diào)是EMT的標(biāo)志之一,在腫瘤診斷、乳腺癌預(yù)后方面發(fā)揮重要作用,但其在BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR中的作用及主要機(jī)制,國內(nèi)外報道甚少。本研究以人乳腺癌敏感株MCF-7和MX誘導(dǎo)的、BCRP高表達(dá)的耐藥株MCF-7/MX為細(xì)胞模型,旨在探討MDR細(xì)胞異常轉(zhuǎn)移的主要機(jī)制,主要就CK18在BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR、遷移和侵襲的作用及機(jī)制進(jìn)行研究。方法:1.MTT實驗測定MCF-7、MCF-7/MX細(xì)胞對不同化療藥物敏感性差異;Western blot測定BCRP等耐藥蛋白在MCF-7和MCF-7/MX細(xì)胞的表達(dá)差異。2.Real time-qPCR、Western blot測定MCF-7、MCF-7/MX細(xì)胞CK18表達(dá)差異。3.ShRNA靶向干擾MCF-7細(xì)胞CK18表達(dá),采用Real time-qPCR、Western blot檢測CK18表達(dá)下調(diào)程度,篩選出兩株干擾程度不同的單克隆細(xì)胞株。4.MTT實驗測定MCF-7、單克隆細(xì)胞株及陰性對照細(xì)胞株對不同化療藥物耐藥差異;Western blot檢測上述細(xì)胞BCRP表達(dá)差異。5.顯微鏡觀察上述五種細(xì)胞形態(tài)變化;Transwell遷移及侵襲、細(xì)胞-基質(zhì)粘附實驗測定其遷移、侵襲及細(xì)胞-粘附能力;RT-PCR、Western blot測定其EMT相關(guān)基因及蛋白表達(dá)。6.RT-PCR、Western blot測定各組細(xì)胞中核因子-κB 65(nuclear factor-κB 65,NF-κB p65)、Snail、Claudin1基因及蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.MCF-7/MX細(xì)胞的MDR表型由BCRP介導(dǎo)。與敏感株MCF-7相比,MCF-7/MX對多種化療藥物顯著耐藥(P0.001),BCRP蛋白表達(dá)明顯升高(P0.001)。2.MCF-7/MX細(xì)胞在形態(tài)與功能上均發(fā)生了EMT。MCF-7細(xì)胞呈典型的上皮細(xì)胞形態(tài),而MCF-7/MX細(xì)胞呈間質(zhì)細(xì)胞表型。與MCF-7細(xì)胞相比,MCF-7/MX細(xì)胞的遷移和侵襲能力均顯著增強(qiáng)(P0.001),細(xì)胞-基質(zhì)粘附能力減弱(P0.001),上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.001),間質(zhì)特異蛋白N-cadherin和vimentin m RNA和蛋白表達(dá)水平均明顯增加(P0.001)。3.CK18參與了BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR。與MCF-7細(xì)胞相比,MCF-7/MX細(xì)胞的CK18 m RNA及蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.001)。ShRNA靶向干擾CK18表達(dá),與親本MCF-7細(xì)胞相比,陰性對照MCF-7/siNC細(xì)胞對多種化療藥物敏感性變化不明顯,差異無顯著性(P0.05),BCRP蛋白的表達(dá)變化不明顯,差異無顯著性(P0.05),而CK18下調(diào)組對化療藥物敏感性明顯下降(P0.01),BCRP蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01)。4.下調(diào)CK18表達(dá)可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞發(fā)生EMT。MCF-7/siNC上皮細(xì)胞特征明顯,而CK18下調(diào)組間質(zhì)細(xì)胞特征明顯。與MCF-7細(xì)胞相比,MCF-7/siNC細(xì)胞的遷移和侵襲、細(xì)胞-基質(zhì)粘附能力、EMT標(biāo)志蛋白的表達(dá)變化不明顯,差異均無顯著性(P0.05),而CK18下調(diào)組細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng)(P0.01),細(xì)胞-基質(zhì)粘附能力減弱(P0.001),上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin mRNA及蛋白表達(dá)水平降低(P0.05),間質(zhì)特異蛋白(N-cadherin、vimentin)mRNA和蛋白水平表達(dá)顯著增強(qiáng)(P0.01)。5.CK18可能通過EMT經(jīng)NF-κB/Snail和NF-κB/Claudin1通路調(diào)控BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR。與MCF-7相比,MCF-7/si NC細(xì)胞中NF-κB p65、Snail、Claudin1mRNA水平及蛋白表達(dá)變化不明顯,差異無顯著性(P0.05),而CK18下調(diào)組細(xì)胞中上述基因水平及蛋白表達(dá)均顯著增加(P0.05)。結(jié)論:1.CK18參與了BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR。2.CK18可能通過EMT經(jīng)NF-κB/Snail和NF-κB/Claudin1通路調(diào)控BCRP介導(dǎo)的乳腺癌MDR。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文5 結(jié) 論. CK18 參與了 BCRP 介導(dǎo)的乳腺癌的 MDR。. CK18 可能通過 EMT 經(jīng) NF-κB/Snail 和 NF-κB/Claudin1 通路調(diào)控 BC癌 MDR，，如 Fig.16 所示。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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2 陳偉娟;王輝;唐勇;劉傳亮;李洪利;李文通;;乳腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化后引發(fā)BCRP介導(dǎo)的多藥耐藥的研究[J];癌癥;2010年02期

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本文編號：2607565