【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)主要研究mi RNA-320d和Fox M1在賁門癌中的表達(dá)情況,探究他們的表達(dá)與賁門癌臨床病理因素及預(yù)后之間的聯(lián)系;研究mi RNA-320d和FoxM1在賁門癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的影響,分析mi RNA-320與FoxM1之間可能的相互作用聯(lián)系,研究二者的功能機(jī)理在賁門癌發(fā)生發(fā)展中。方法:收集30例河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科2012年04月至2013年03月期間收治的賁門癌患者,以及30例2013年03月至2013年08月安陽腫瘤醫(yī)院收治的賁門癌患者,行賁門癌根治術(shù)時(shí)取其癌組織及對應(yīng)的癌旁組織,所有病例術(shù)前未經(jīng)放療和化療。采用RT-PCR方法檢測miRNA-320d和FoxM1分別在賁門癌及癌旁組織中mRNA核酸水平的表達(dá)。采用免疫組織化學(xué)法和Western blot檢測Fox M1在癌旁組織和賁門癌組織中的表達(dá)水平,并作統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,進(jìn)而研究miRNA-320d和FoxM1的表達(dá)水平與賁門癌患者的預(yù)后及臨床病理因素之間的聯(lián)系。對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Graphpad Prism5.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,當(dāng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果P0.05時(shí),我們認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.RT-PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,mi RNA-320d的mRNA核酸表達(dá)水平在賁門癌組織中與相應(yīng)癌旁組織相比表達(dá)明顯降低(P0.001),而相反,FoxM1的mRNA核酸水平表達(dá)在賁門癌組織中與相應(yīng)癌旁組織相比表達(dá)明顯升高(P0.0001),與臨床病理特征聯(lián)系,mi RNA-320d的mRNA核酸表達(dá)水平與腫瘤組織大小有關(guān)(P0.05),Fox M1的mRNA核酸表達(dá)水平與腫瘤組織大小及TNM分期有關(guān)(P0.05),具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而且mi RNA-320d和FoxM1在賁門癌組織中的核酸表達(dá),通過統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性分析得出呈負(fù)相關(guān)性。2.Western blot實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,FoxM1蛋白在賁門癌組織中與相應(yīng)癌旁組織相比表達(dá)明顯提高(P=0.0363),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.免疫組化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,Fox M1的陽性表現(xiàn)大部分定位于胞核呈棕黃色、黃色顆粒,有些定位于胞質(zhì)呈黃色顆粒。FoxM1在60例賁門癌組織、相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)陽性率分別為68%、45%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),與臨床病理特征聯(lián)系,FoxM1的陽性表達(dá)與腫瘤組織大小及TNM分期有關(guān),具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.對60例賁門癌病人進(jìn)行隨訪,Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)學(xué)生存分析顯示,miRNA-320d高表達(dá)的患者組預(yù)后明顯好于miRNA-320d低表達(dá)的患者組(P0.05);同時(shí),FoxM1陽性表達(dá)組與陰性組相比預(yù)后較差(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.miRNA-320d在賁門癌組織中的表達(dá)明顯低于賁門癌旁組織,而FoxM1在賁門癌組織中的表達(dá)明顯高于賁門癌旁組織。表明mi RNA-320d和FoxM1的異常表達(dá)量有可能與賁門癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。且mi RNA-320d與FoxM1在核酸水平表達(dá)呈負(fù)相關(guān),推測可能上游基因miRNA-320d通過抑制下游基因FoxM1的表達(dá)從而在賁門癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用,具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步探究,兩因子可能成為賁門癌治療的分子靶標(biāo)。2.通過與臨床病理特征聯(lián)系,miRNA-320d的表達(dá)高低與腫瘤組織大小相關(guān),而FoxM1的核酸表達(dá)高低、蛋白表達(dá)陽性率與腫瘤組織大小及TNM分期有關(guān)。mi RNA-320d高表達(dá)的賁門癌患者組預(yù)后明顯好于低表達(dá)的賁門癌患者組;FoxM1陽性表達(dá)組與陰性組相比預(yù)后較差,故miRNA-320d與FoxM1可能成為賁門癌患者預(yù)后的指標(biāo)。
【圖文】：

為了進(jìn)一步驗(yàn)證 miRNA-320d 與 FoxM1 在賁門癌患者中 mRN況，將所有組織樣品抽提 RNA 及合成 cDNA 第一鏈后，進(jìn)行 PCR 對所有樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以 U6 為內(nèi)參進(jìn)行對照，，實(shí)時(shí)熒光定量 P圖 3-1 所示：發(fā)現(xiàn) miRNA-320d mRNA 在 60 例賁門癌組織中，其中有門癌組織中的表達(dá)低于相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)（50/60），為 83.3%；示：賁門癌組織中 miRNA-320d 的相對表達(dá)量為 1.137±0.101，明顯織的 2.042±0.116（t=5.885，P<0.0001），統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性。為內(nèi)參進(jìn)行對照，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 結(jié)果如圖 3-3 所示：發(fā)現(xiàn) FoxM60 例賁門癌組織中，其中有 53 例在賁門癌組織中的表達(dá)高于相應(yīng)癌表達(dá)（53/60），為 88.3%；如圖 3-4 所示：賁門癌組織 FoxM1 mRN達(dá)量為 5.812±0.533，明顯高于癌旁組織的 2.591±0.265（t=5.412，P<統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性。并且對賁門癌組織中 miRNA-320d 和 Fox平表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如圖 3-5 所示：結(jié)果呈負(fù)相關(guān)性（P=0.0009），統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性。

圖 3-2 賁門癌與相應(yīng)癌旁組織中 miRNA-320d mRNA 的表達(dá)Fig. 3-2 The compare of miRNA-320d between GCA and matchingnormal tissues adjacent to carcinoma
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2586725