【摘要】：目的:探討白細(xì)胞介素17A(Interleukin-17A,IL-17A)對(duì)人肝癌細(xì)胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L干性的影響,以期進(jìn)一步研究IL-17A與肝癌發(fā)展之間的關(guān)系。方法:經(jīng)ELISA檢測(cè)人肝癌細(xì)胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L是否能分泌IL-17A,進(jìn)一步通過體外3D成球?qū)嶒?yàn)研究IL-17A對(duì)Hep 3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L肝癌細(xì)胞系成球能力的影響;采用實(shí)時(shí)無標(biāo)記動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)(Real Time Cellular Analysis,RTCA)檢測(cè)IL-17A對(duì)成球能力增強(qiáng)的肝癌細(xì)胞增殖及遷移的影響;采用SYBRGreen實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-timePCR,qRT-PCR)檢測(cè)加入IL-17A后成球能力增強(qiáng)的肝癌細(xì)胞中IL-17RA以及IL-17RC的mRNA的表達(dá)情況;運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)分析加入IL-17A后成球能力增強(qiáng)的肝癌細(xì)胞上干性相關(guān)表面分子標(biāo)志物CD133、CD44及EpCAM的表達(dá),同時(shí),通過qRT-PCR檢測(cè)干性相關(guān)基因5OX2,NANOG,OCT4及BMI1的mRNA的表達(dá)情況;通過蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial to mesenchymal transition,EMT)相關(guān)蛋白 E-鈣粘蛋白(E-cadherin),N-鈣粘蛋白(N-cadherin),波形蛋白(vimentin)的表達(dá)。結(jié)果:人肝癌細(xì)胞系Hep3B、HepG2、MHCC97H及MHCC97L自身均不能分泌IL-17A,所以可在培養(yǎng)上述細(xì)胞時(shí)加入IL-17A做進(jìn)一步研究。研究發(fā)現(xiàn),在存在50ng/ml IL-17A及接種細(xì)胞數(shù)均為500個(gè)的條件下,Hep 3B細(xì)胞的成球數(shù)目顯著增加[由(113.0±10.3)個(gè)增加至(180.0±7.2)個(gè),t=5.533,P0.001],而 HepG2(t=0.317,P=0.760),MHCC97H(t=1.087,P=0.325)及 MHCC97L(t=0.279,P=0.785)的成球數(shù)目無明顯變化。同時(shí),IL-17A促進(jìn)了 Hep3B細(xì)胞的增殖和遷移。對(duì)Hep3B的進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),加入50ng/ml IL17A后,IL-17A的應(yīng)答受體IL-17RA及IL-17RC的mRNA的表達(dá)水平隨著作用時(shí)間的增加而升高;干性相關(guān)基因SOX2(t=4.749,P=0.042),NANOG(t=19.600,P=0.003),OCT4(t=37.310,P0.001),BMI(t=16.810,P=0.004)表達(dá)顯著上調(diào);通過qRT-PCR檢測(cè)mRNA水平及Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn),隨著IL-17A作用時(shí)間的增加,EMT相關(guān)上皮源性標(biāo)志物E-Cadherin的mRNA表達(dá)水平先降低后升高,蛋白表達(dá)無明顯變化;間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-Cadherin的mRNA及蛋白在50ng/ml IL-17A作用48小時(shí)后表達(dá)增加,vimentin的mRNA表達(dá)水平先升高后降低,蛋白不表達(dá)。結(jié)論:IL-17A在一定程度上增強(qiáng)了 Hep 3B肝癌細(xì)胞的干性。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2576034