發(fā)布時(shí)間：2019-11-29 18:26

【摘要】：背景及目的盡管人類乳頭瘤狀病毒疫苗的廣泛應(yīng)用和宮頸癌的定期篩查,宮頸癌仍是造成全球婦女死亡的最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈年輕化趨勢(shì)。因此探尋宮頸癌的發(fā)病機(jī)制及尋找新的治療方法顯得尤為迫切。腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是腫瘤微環(huán)境中最主要的細(xì)胞,與肌成纖維細(xì)胞相似,在細(xì)胞形態(tài)和生物學(xué)行為上具有平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的雙重特性。它可以分泌多種細(xì)胞因子,促使腫瘤上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化與進(jìn)展。盡管不同類型的間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞被認(rèn)為是CAFs的前體細(xì)胞,但宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的確切來(lái)源及其機(jī)制目前仍不清楚。人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)廣泛存在于組織中,在誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞表型形成中具有重要作用,它能上調(diào)體內(nèi)和體外成纖維細(xì)胞中平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的含量。研究證實(shí),在宮頸癌上皮細(xì)胞中可見(jiàn)大量的TGF-β1的表達(dá),明顯高于正常宮頸上皮細(xì)胞和宮頸上皮內(nèi)瘤變上皮細(xì)胞。TGF-β1在宮頸癌中的過(guò)表達(dá)可能成為CAFs轉(zhuǎn)化的潛在機(jī)制。但CAFs的轉(zhuǎn)化是否依賴于TGF-β1目前尚不明確。本研究旨在分離純化并鑒定CAFs,初步探討CAFs的生物學(xué)特性。研究TGF-β1在宮頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞生成中的作用。材料和方法1.用膠原酶消化法分離正常宮頸成纖維細(xì)胞(normal fibroblasts,NFs)和CAFs;在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白(Vimentin)、α-SMA和成纖維細(xì)胞活化蛋白(fibroblast activation proteinα,FAPα)。2.ELISA法檢測(cè)CAFs和Hela細(xì)胞共培養(yǎng)、Hela、CAFs細(xì)胞上清液中TGF-β1的水平。3.重組人TGFβ1處理NFs,設(shè)空白對(duì)照組,72h后收集成纖維細(xì)胞,免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA和FAPα。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(`x±s)表示。組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.成功分離出CAFs和NFs,鏡下可見(jiàn)CAFs大小、形狀不一,密度抑制和接觸抑制消失。NFs大小、形狀一致,存在密度抑制和接觸抑制。CAFs的生長(zhǎng)速度快于NFs(Z=㧟2.160,P=0.031)。CAF高表達(dá)α-SMA和FAPα,而NFs不表達(dá)α-SMA和FAPα,兩者均表達(dá)Vimentin。2.CAFs和Hela細(xì)胞共培養(yǎng)、CAFs、Hela細(xì)胞上清液中TGF-β1的濃度分別為1087.26.54±71.42 ng/L,449.93±19.99 ng/L,703.29±27.34 ng/L。3.TGF-β1處理組高表達(dá)FAPα和α-SMA;空白對(duì)照組不表達(dá)FAPα和α-SMA。結(jié)論1.CAFs具有平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞雙重特性,其增殖能力強(qiáng)于NFs。2.TGF-β1可在體外誘導(dǎo)NFs向?qū)m頸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 饒寒敏;湯雪明;柴本甫;李慧;朱雅萍;;丹參對(duì)成纖維細(xì)胞成骨的掃描電鏡觀察[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2001年S1期

2 朱紅梅;成纖維細(xì)胞對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用研究[J];醫(yī)學(xué)綜述;2002年06期

3 魏玉玲,鄒慶,梁克玉;中藥增骨Ⅰ號(hào)對(duì)體外成纖維細(xì)胞的影響[J];中醫(yī)正骨;2004年01期

4 盧旭華,陳德玉,趙定麟;成纖維細(xì)胞成骨潛能的研究進(jìn)展[J];骨與關(guān)節(jié)損傷雜志;2004年08期

5 魏海峰;井玲;魏雁虹;劉輝;齊玲;趙志濤;張秀云;李才;;氟對(duì)二維和三維培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子-1表達(dá)的影響[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年05期

6 張誠(chéng)s，

本文編號(hào)：2567569