發(fā)布時(shí)間：2019-10-28 12:36

【摘要】：目的:長(zhǎng)鏈非編碼RNA參與調(diào)控多種生物學(xué)功能,其異常表達(dá)可導(dǎo)致多種疾病包括腫瘤。通過高通量基因芯片技術(shù)篩選肝癌中差異表達(dá)的lnc RNA,探究其在肝癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:對(duì)16例肝癌及其癌旁組織進(jìn)行高通量lnc RNA芯片,生物信息學(xué)分析篩選差異表達(dá)的lnc RNA,選擇肝癌組織中顯著下調(diào)的lnc RNA,命名為lnc-HTSG。結(jié)合數(shù)據(jù)庫分析其基因組信息和結(jié)構(gòu)功能信息,RT-PCR驗(yàn)證lnc-HTSG在肝癌中的差異表達(dá)。RACE實(shí)驗(yàn)確定lnc-HTSG兩端序列,Overlap PCR擴(kuò)增lnc-HTSG全長(zhǎng)序列;構(gòu)建重組p LVX-Aclnc-HTSG慢病毒質(zhì)粒,包裝慢病毒并感染肝癌細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)lnc-HTSG過表達(dá);設(shè)計(jì)引物檢測(cè)lnc-HTSG 3'末端和5'末端轉(zhuǎn)錄終止情況以及3'末端加尾操作確保lnc-HTSG的轉(zhuǎn)錄完整性;通過靶向lnc-HTSG的si RNA,下調(diào)HCC-LM3內(nèi)源性lnc-HTSG,重組病毒感染SMMU-7721細(xì)胞上調(diào)lnc-HTSG,細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)lnc-HTSG對(duì)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果:通過lnc RNA芯片及信息學(xué)分析篩選在肝癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)的lnc-HTSG。數(shù)據(jù)庫分析其具有轉(zhuǎn)錄表達(dá)特征,部分序列在進(jìn)化上高保守,RT-PCR結(jié)果和表達(dá)譜芯片結(jié)果一致。RACE確定lnc-HTSG兩端序列,克隆全長(zhǎng)并構(gòu)建慢病毒過表達(dá)系統(tǒng),加尾實(shí)驗(yàn)證實(shí)lnc-HTSG轉(zhuǎn)錄完整性。體外細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,與對(duì)照組相比,下調(diào)lnc-HTSG的表達(dá)促進(jìn)了HCC-LM3細(xì)胞的遷移和侵襲,而過表達(dá)lnc-HTSG抑制了SMMU-7721細(xì)胞的遷移。結(jié)論:長(zhǎng)鏈非編碼RNA-HTSG在肝癌組織中顯著下調(diào),其缺失可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲,是重要的肝癌抑癌基因。
【圖文】：

圖 1-1 lnc-HTSG 在肝癌及其癌旁組織中的差異表達(dá)（p<0.05）論生物的基因表達(dá)在機(jī)體不同的生長(zhǎng)發(fā)育階段、組織的不同分化同的生物或者物理因素刺激階段，都會(huì)發(fā)生差異性的表達(dá)[12]。空下進(jìn)行的差異選擇構(gòu)成了細(xì)胞生命活動(dòng)復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制和網(wǎng)析這些差異，可為生命活動(dòng)過程的研究提供很多重要的線索。通過測(cè)定目的基因在疾病發(fā)展和治療過程中的差異表達(dá)，可以多疾病的新方法，例如早期的診斷標(biāo)志物等。基因的差異表達(dá)著的，，大部分腫瘤的進(jìn)展是有諸多基因表達(dá)改變的積累引起的癌基因和各種調(diào)節(jié)通路的調(diào)控基因[13]。還有細(xì)胞周期調(diào)控、粘生等環(huán)節(jié)的調(diào)控基因[14]。這些基因的差異表達(dá)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的細(xì)癌基因的差異累計(jì)通常會(huì)促進(jìn)腫瘤增殖和侵襲。

第二部分 長(zhǎng)鏈非編碼 RNA-HTSG 在肝癌中的表達(dá)和功能研究1) 5 cycles：94 ℃ 30 s72 ℃ 3 min2) 5 cycles：94 ℃ 30 s70 ℃ 30 s72 ℃ 3 min3) 25 cycles：94 ℃ 30 s68 ℃ 30 s72 ℃ 3 min(6) 72 ℃延伸 10 min，終止反應(yīng)，PCR 產(chǎn)物進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠電泳。整個(gè) 5'和 3'RACE 的流程設(shè)計(jì)可見下兩圖：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李惠芬;馬桂芳;宋祥和;;肝癌衍生生長(zhǎng)因子在胃腺癌組織中的表達(dá)及意義[J];海南醫(yī)學(xué);2014年07期

2 張學(xué)軍;湯虎成;劉飛;;長(zhǎng)鏈非編碼RNA Gas5在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J];臨床肺科雜志;2015年02期

本文編號(hào)：2553112