【摘要】：目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來在全世界范圍內(nèi),乳腺癌患者發(fā)病年齡呈低齡化,發(fā)病率呈上升趨向。其中,5-10%的乳腺癌患者屬于家族性乳腺癌,而乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2基因突變只能解釋20-25%的家族性乳腺癌病因。MicroRNA(miRNA)是一種小型非編碼RNA,長度約為19-25個核苷酸。大部分基因的轉(zhuǎn)錄過程都受到mi RNA的調(diào)控。通過這些調(diào)控,miRNA在生物體發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、應(yīng)激等過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。MiRNA結(jié)合位點單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphisms,SNP)指的是miRNA與目的mRNA在3'端非翻譯區(qū)(3'untranslated region,3'UTR)的結(jié)合位點發(fā)生單個核苷酸在基因組水平上的變異,從而造成該結(jié)合位點的DNA序列多態(tài)性。其可調(diào)控miRNA與目的基因的表達(dá),進(jìn)而影響到惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險、治療反應(yīng)及預(yù)后效果。本研究分別對RYR3(rs1044129),KIAA0423(rs1053667),C14orf101(rs4901706),GOLGA7(rs11337),KRT81(rs3660)五個miRNA結(jié)合位點的SNP進(jìn)行測序分析,結(jié)合病例-對照研究,尋找與散發(fā)性及家族性乳腺癌發(fā)生風(fēng)險相關(guān)的特異SNP位點,并更深入探尋該位點與乳腺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。方法:1研究對象:乳腺癌組患者為2013年1月~2016年3月間,在河北省腫瘤醫(yī)院乳腺中心住院的患者,經(jīng)穿刺、術(shù)后病理確診為乳腺癌。其中,散發(fā)乳腺癌組152例抗凝靜脈血標(biāo)本,家族乳腺癌組30例抗凝靜脈血標(biāo)本,都取自乳腺癌患者術(shù)前靜脈血樣;對照組的130例抗凝靜脈血標(biāo)本,都取自2013年10月~2016年10月間,在河北省腫瘤醫(yī)院體檢的正常人,具有詳細(xì)的體檢資料,并除外與乳腺癌相關(guān)的疾病。2基因組DNA提取:用血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)(北京天根生化科技有限公司)提取靜脈血標(biāo)本的基因組DNA,提取后放在-80℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?標(biāo)本dna的擴(kuò)增及snp篩查:根據(jù)ncbi數(shù)據(jù)庫中五個mirna結(jié)合位點對應(yīng)的目的基因片段,來設(shè)計pcr擴(kuò)增引物,然后根據(jù)pcr預(yù)混試劑盒擴(kuò)增,得到的pcr產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳證實后再送往上海捷瑞生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。該公司使用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測反應(yīng)(polymerasechainreaction-ligasedetectionreaction,pcr-ldr)方法對ryr3(rs1044129),kiaa0423(rs1053667),c14orf101(rs4901706),golga7(rs11337),krt81(rs3660)的snp位點進(jìn)一步分析。4統(tǒng)計分析:采用t檢驗(studentt-test)比較計量資料。采用χ2檢驗對散發(fā)性及家族性乳腺癌組和對照組的ryr3(rs1044129),kiaa0423(rs1053667),c14orf101(rs4901706),golga7(rs11337),krt81(rs3660)的snp位點基因型頻率進(jìn)行分析。采用χ2檢驗對有意義的snp位點基因型頻率對乳腺癌患者臨床病理學(xué)特征影響的分析。所得到的數(shù)據(jù)都采用spss21.0(spssinc.,chicago,il,usa)統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,認(rèn)為p0.05時有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1對散發(fā)性及家族性乳腺癌組與對照組的年齡進(jìn)行比較,結(jié)果顯示散發(fā)性乳腺癌組與對照組的年齡(t=-1.215,p=0.225)、家族性乳腺癌組與對照組的年齡(t=1.058,p=0.292)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),說明散發(fā)性及家族性乳腺癌組與對照組之間年齡均衡。2對五個基因結(jié)合位點的snp分布頻率分析顯示,在散發(fā)性乳腺癌組與對照組之間,rs1044129、rs1053667、rs4901706、rs11337多態(tài)性位點進(jìn)行各組間比較,發(fā)現(xiàn)此四個位點snp分布頻率無明顯差異。而對于krt81基因的多態(tài)位點rs3660,gg、cg+cc基因型在散發(fā)性乳腺癌組中出現(xiàn)的頻率是70.4%和29.6%,而在對照組中出現(xiàn)的頻率為42.9%和57.1%,rs3660位點gg基因型攜帶者相對cg+cc基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險為5.548倍(oddsratio,5.548;95%ci,3.326-9.256;p=0.000)。3在家族性乳腺癌組與對照組之間,對于krt81基因的多態(tài)位點rs3660,gg、cg+cc基因型在家族性乳腺癌組中出現(xiàn)的頻率是60.0%和40.0%,而在對照組中出現(xiàn)的頻率為42.9%和57.1%,家族性乳腺癌患者中rs3660位點gg基因型攜帶者相對cg+cc基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險為3.497倍(oddsratio,3.497;95%ci,1.541-7.937;p=0.002)。除了krt81基因的多態(tài)位點rs3660存在差異之外,對于RYR3基因的多態(tài)位點rs1044129,AA、AG+GG基因型在家族性乳腺癌組中出現(xiàn)的頻率是63.3%和26.7%,而在對照組中出現(xiàn)的頻率為41.5%和58.5%,對于rs1044129位點AA基因型攜帶者相對AG+GG基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險為2.431倍(odds ratio,2.431;95%CI,1.070-5.522;P=0.031)。而rs1053667、rs4901706、rs11337這三個位點SNP分布頻率無明顯差異。4在KRT81(rs3660)的SNP位點基因型對乳腺癌患者臨床病理學(xué)特征影響的分析中,GG型與CG+CC型乳腺癌患者在原發(fā)腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤病理學(xué)類型、AJCC分期、免疫組化表達(dá)及分子分型等方面均無明顯差異。結(jié)論:1在散發(fā)乳腺癌組及家族性乳腺癌組與對照組之間,KRT81基因的多態(tài)位點rs3660的SNP分布頻率存在差異,此位點可能是與乳腺癌發(fā)生相關(guān)的SNP位點。2在家族性乳腺癌組與對照組之間,除了在KRT81基因的多態(tài)位點rs3660存在差異,RYR3基因的多態(tài)位點rs1044129的SNP分布頻率也存在差異,此位點可能是家族性乳腺癌發(fā)生相關(guān)的SNP位點。3尚不能認(rèn)為KRT81基因的多態(tài)位點rs3660基因型分布頻率與乳腺癌患者的臨床病理特征(AJCC分期、病理類型、免疫組化表達(dá)情況、分子分型等)有相關(guān)性。
【圖文】：

RYR3基因PCR產(chǎn)物凝膠電泳成像

MicroRNA作用機(jī)制Fig.1MicroRNAprocessingmachinery
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Jianjian Gao;Qingyun Zhang;Jianjun Xu;Lijuan Guo;Xuefeng Li;;Clinical significance of serum miR-21 in breast cancer compared with CA153 and CEA[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 羅曉旭;KRT81及KIAA0423和MicroRNA結(jié)合位點單核苷酸多態(tài)性與結(jié)腸癌發(fā)生的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 吳忱思;MicroRNA結(jié)合位點單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性肝癌發(fā)生及其預(yù)后的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：2549949