【摘要】：研究背景和目的:多年以來(lái)我國(guó)一直是原發(fā)性肝癌高發(fā)的國(guó)家,在臨床上原發(fā)性肝癌也是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,全球每年50%以上的新發(fā)病例發(fā)生在我國(guó)。病理上,原發(fā)性肝癌可以分為肝細(xì)胞癌和膽管細(xì)胞癌,肝細(xì)胞癌是其中常見(jiàn)的病理類型,所占比例約為75%。雖然近年隨著科技進(jìn)步和研究的深入,我們獲得了大量的新發(fā)現(xiàn)和新突破,但是原發(fā)性肝癌臨床治療后的長(zhǎng)期生存率沒(méi)有得到明顯的提升,顯示肝癌治療研究的艱巨性和復(fù)雜性。Fbxw7(F-box and WD repeat domain-containing 7,FBW7)又稱CDC4,是SCF型泛素連接酶的底物識(shí)別組成蛋白。Fbxw7能夠通過(guò)特異性識(shí)別并結(jié)合被磷酸化的底物蛋白,從而使目的蛋白通過(guò)泛素蛋白酶系統(tǒng)降解。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7參與了許多重要信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)蛋白的降解。Fbxw7是重要的抑癌基因,近年來(lái)不同的腫瘤臨床及實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7在維持腫瘤基因的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)移、侵襲、細(xì)胞分化、耐藥中具有重要的作用。目前FBXW7與抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制及相關(guān)臨床應(yīng)用成為研究熱點(diǎn)。本研究旨在研究Fbxw7在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制。觀察Fbxw7在肝癌中的表達(dá)情況以及其表達(dá)水平與臨床預(yù)后的相關(guān)性;通過(guò)外源性差異表達(dá)Fbxw7細(xì)胞系,研究Fbxw7對(duì)肝癌細(xì)胞系的生物學(xué)行為的影響,并檢測(cè)其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的改變,深入了解Fbxw7對(duì)肝癌的調(diào)節(jié)作用。最后在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證和了解Fbxw7對(duì)肝癌的作用。期望通過(guò)對(duì)Fbxw7的深入研究從而為臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化提供重要的科研證據(jù)。研究方法:1.通過(guò)Real-Time PCR及Western blot方法在RNA及蛋白水平檢測(cè)Fbxw7在肝臟癌和癌旁組織中以及不同肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況;通過(guò)Real-Time PCR方法檢測(cè)Fbxw7不同亞型在肝癌中的分布情況。2.利用組織芯片進(jìn)行Fbxw7的組化染色,結(jié)合病人的預(yù)后及病理資料進(jìn)行相關(guān)性分析。3.通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染聯(lián)合抗性基因篩選,建立外源性過(guò)表達(dá)Fbxw7的細(xì)胞系,檢測(cè)過(guò)表達(dá)Fbxw7對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、克隆形成、轉(zhuǎn)移、侵襲以及成球能力的影響。4.通過(guò)RNA干擾的方法,建立外源性干擾Fbxw7表達(dá)的細(xì)胞,觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲能力的影響,反向驗(yàn)證Fbxw7對(duì)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響。5.通過(guò)皮下荷瘤模型以及尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移模型,在體內(nèi)研究差異化表達(dá)Fbxw7的肝癌細(xì)胞的功能。6.通過(guò)Real-Time PCR方法檢外源性差異表達(dá)Fbxw7后EMT相關(guān)基因的改變情況。7.利用不同炎癥因子刺激,檢測(cè)差異化表達(dá)Fbxw7對(duì)不同炎癥信號(hào)通路的影響。8.通過(guò)Real-Time PCR及Western blot方法檢測(cè)Fbxw7對(duì)TGF-β信號(hào)通路上游及下游的影響,另外通過(guò)轉(zhuǎn)移、侵襲實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)驗(yàn)證其對(duì)細(xì)胞功能的影響。9.通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)研究Fbxw7與Slug的相互作用情況,利用降解實(shí)驗(yàn)以及共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究Fbxw7對(duì)Slug降解的促進(jìn)作用及方式;通過(guò)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)研究Fbxw7與Slug共定位情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.大多數(shù)病人肝癌組織中Fbxw7表達(dá)水平低于癌旁組織,而癌栓組織中Fbxw7表達(dá)水平極低,肝臟組織中Fbxw7α亞型表達(dá)最多。2.患者肝癌組織中的Fbxw7表達(dá)水平越高預(yù)后越好,呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),并且低表達(dá)的Fbxw7與患者的AFP、腫瘤包膜和TNM分級(jí)顯著相關(guān)。3.肝癌細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)Fbxw7能夠減慢肝癌細(xì)胞的增殖,減少細(xì)胞克隆形成和成球數(shù)量,減少細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲數(shù)量。4.肝癌細(xì)胞系中干擾Fbxw7后,增加了肝癌細(xì)胞的增殖,增加了細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲數(shù)量。5.過(guò)表達(dá)Fbxw7能減小肝癌細(xì)胞體內(nèi)荷瘤的體積以及重量,并且能夠明顯減少肝癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量。6.過(guò)表達(dá)Fbxw7能減弱炎癥信號(hào)通路的反應(yīng),降低EMT相關(guān)基因的表達(dá)。7.Fbxw7能夠通過(guò)抑制TGF-β信號(hào)通路上下游,進(jìn)而影響肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。8.Fbxw7能夠通過(guò)降解Slug從另一方面抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:本研究通過(guò)外源性差異化表達(dá)Fbxw7在體內(nèi)和體外研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7能夠負(fù)向調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、轉(zhuǎn)移、侵襲和成球能力;Fbxw7通過(guò)對(duì)TGF-β信號(hào)通路的上下游的負(fù)向調(diào)控以及促進(jìn)Slug的降解,參與調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。此外,Fbxw7的表達(dá)水平與病人的術(shù)后生存及臨床預(yù)后負(fù)相關(guān),提示其可以成為肝癌預(yù)后的一個(gè)因素。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王勇姿,俞超芹,凌昌全,衛(wèi)立辛;肝癌細(xì)胞系的研究概況[J];上海醫(yī)學(xué);2000年02期

2 王蓬,陳孝平,PBSLai,CK Leow,Joseph W Y Lau;二十碳五烯酸對(duì)三種肝癌細(xì)胞系作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華普通外科雜志;2001年01期

3 彭林,王衛(wèi)東,孫建,簡(jiǎn)志祥,杜嘉林,區(qū)金銳;穩(wěn)定表達(dá)促血管生成素基因肝癌細(xì)胞系的建立及產(chǎn)物的檢測(cè)[J];廣東醫(yī)學(xué);2003年07期

4 趙蕩;陳宏武;許磊;劉飛勇;;不同時(shí)期肝癌免疫殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)探討[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年S1期

5 郭曉林;姜雅秋;金清龍;;多藥耐藥相關(guān)蛋白-3表達(dá)與肝癌耐藥的相關(guān)性[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年11期

6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細(xì)胞系的建立[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1978年10期

7 陸榮華;陳尊器;陳瑞銘;;人體肝癌細(xì)胞系體外惡性浸潤(rùn)行為的研究[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1982年02期

8 張志培,施新猷,李六金,劉雪松,江遜,彭磊,趙佐慶;小鼠免疫力對(duì)接種人類肝癌細(xì)胞系9724生長(zhǎng)的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年07期

9 張志仁,徐順清,周宜開(kāi),任恕,劉志偉,呂斌,徐永俊;一株受二VA英類化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)的螢光素酶肝癌細(xì)胞系[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2001年06期

10 董琳,王桂珍;從分子基因水平開(kāi)展中醫(yī)藥防治肝癌的研究[J];甘肅中醫(yī);2002年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 符兆英;劉凱歌;徐光華;;肝癌細(xì)胞系中乙型肝炎病毒x蛋白與缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

2 張朵;朱海英;謝東莆;胡以平;;肝癌細(xì)胞中存在SP細(xì)胞[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 汪謙;曹良啟;陳錫林;甄茂川;黃曉卉;傅新暉;;過(guò)氧化物酶增殖物激活受體活化抑制肝癌細(xì)胞遷移的研究[A];廣東省肝臟病學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文集[C];2007年

4 鄧欣;蔣小玲;李輝;吳其愷;聶廣;劉欽;;表達(dá)耐拉米夫定乙型肝炎病毒肝癌細(xì)胞系的建立[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

5 吳塵軒;杜智;朱爭(zhēng)艷;高英堂;王毅軍;只丹琮;孫泉;;肝癌免疫治療微環(huán)境和樹(shù)突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2007年

6 趙主江;單云峰;樊紅;程欲超;成建;權(quán)艷梅;張建瓊;謝維;;DNMT3A siRNA穩(wěn)定表達(dá)載體的構(gòu)建及其沉默效率的鑒定[A];江蘇省遺傳學(xué)會(huì)第七屆代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

7 田德安;;RhoA短發(fā)夾狀雙鏈RNA對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

8 高倩;;肝癌HepG2細(xì)胞系分泌的免疫抑制物質(zhì)的研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

9 代智;劉銀坤;馮巨濤;宋海燕;申華麗;張麗君;崔杰峰;;高低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞系差異糖蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

10 張盛周;俞明月;謝晶;戴谷;李朝軍;;Met與Fas基因在肝癌組織和肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 記者 胡德榮;肝癌患者自噬性缺陷表型與預(yù)后不良緊密相關(guān)[N];健康報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王驥;凝集素富集糖肽聯(lián)合酶促~(18)O_3標(biāo)記的定量N-糖蛋白組學(xué)方法在肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)研究中的應(yīng)用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 劉坤;Bcl-2/Twist1蛋白互作在缺氧促進(jìn)肝癌血管生成擬態(tài)形成中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 陳勇;蓽茇酰胺抑制肝癌細(xì)胞遷移/侵襲的作用及其機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2015年

4 林鎮(zhèn)海;NR1D1通過(guò)DUOX2/MCP-1途徑募集巨噬細(xì)胞促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制及臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 丁坤;骨橋蛋白促進(jìn)肝癌細(xì)胞順鉑耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2016年

6 馬春亮;KLF17在肝癌中的作用及對(duì)肝癌預(yù)后的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

7 幸思忠;URG4/URGCP激活NF-κB通路調(diào)控肝細(xì)胞癌血管增生的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 范婭涵;Hedgehog信號(hào)通路調(diào)控Twist1表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 張素潔;長(zhǎng)非編碼RNA LncTSG1抑制肝癌轉(zhuǎn)移的功能及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

10 梁東;Fbxw7促進(jìn)Slug降解抑制TGF-β誘導(dǎo)的肝癌轉(zhuǎn)移[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田蕓蕓;人臍帶MSCs上清對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2影響的比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 徐辰;NKCC1促進(jìn)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制及其抑制劑用于抗腫瘤藥物的探索[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 楊霞;循環(huán)肝癌細(xì)胞CD147表型鑒定在指導(dǎo)利卡汀個(gè)體化治療中的應(yīng)用潛能探索[D];蘇州大學(xué);2015年

4 石志勇;FOXF2在肝癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后價(jià)值的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 陳楊;缺氧誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞EMT及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 唐俊;miR-612對(duì)肝癌細(xì)胞干性的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 李韻;miR-27b-5p促進(jìn)肝癌細(xì)胞向肝癌干樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化及其機(jī)制研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李霄;BMP4對(duì)肝癌VM形成影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

9 曹漪伊;HBV通過(guò)上調(diào)miR-331-3p的表達(dá)從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

10 黃亞運(yùn);以熱休克蛋白為靶點(diǎn)的抗HBV藥物研究[D];湖北工業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：2543099