【摘要】：研究背景和目的:多年以來我國一直是原發(fā)性肝癌高發(fā)的國家,在臨床上原發(fā)性肝癌也是常見的惡性腫瘤之一,全球每年50%以上的新發(fā)病例發(fā)生在我國。病理上,原發(fā)性肝癌可以分為肝細胞癌和膽管細胞癌,肝細胞癌是其中常見的病理類型,所占比例約為75%。雖然近年隨著科技進步和研究的深入,我們獲得了大量的新發(fā)現(xiàn)和新突破,但是原發(fā)性肝癌臨床治療后的長期生存率沒有得到明顯的提升,顯示肝癌治療研究的艱巨性和復(fù)雜性。Fbxw7(F-box and WD repeat domain-containing 7,FBW7)又稱CDC4,是SCF型泛素連接酶的底物識別組成蛋白。Fbxw7能夠通過特異性識別并結(jié)合被磷酸化的底物蛋白,從而使目的蛋白通過泛素蛋白酶系統(tǒng)降解。近來的研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7參與了許多重要信號通路節(jié)點蛋白的降解。Fbxw7是重要的抑癌基因,近年來不同的腫瘤臨床及實驗室研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7在維持腫瘤基因的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)移、侵襲、細胞分化、耐藥中具有重要的作用。目前FBXW7與抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制及相關(guān)臨床應(yīng)用成為研究熱點。本研究旨在研究Fbxw7在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制。觀察Fbxw7在肝癌中的表達情況以及其表達水平與臨床預(yù)后的相關(guān)性;通過外源性差異表達Fbxw7細胞系,研究Fbxw7對肝癌細胞系的生物學(xué)行為的影響,并檢測其細胞內(nèi)信號通路的改變,深入了解Fbxw7對肝癌的調(diào)節(jié)作用。最后在體內(nèi)進一步驗證和了解Fbxw7對肝癌的作用。期望通過對Fbxw7的深入研究從而為臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化提供重要的科研證據(jù)。研究方法:1.通過Real-Time PCR及Western blot方法在RNA及蛋白水平檢測Fbxw7在肝臟癌和癌旁組織中以及不同肝癌細胞系中的表達情況;通過Real-Time PCR方法檢測Fbxw7不同亞型在肝癌中的分布情況。2.利用組織芯片進行Fbxw7的組化染色,結(jié)合病人的預(yù)后及病理資料進行相關(guān)性分析。3.通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染聯(lián)合抗性基因篩選,建立外源性過表達Fbxw7的細胞系,檢測過表達Fbxw7對肝癌細胞增殖、克隆形成、轉(zhuǎn)移、侵襲以及成球能力的影響。4.通過RNA干擾的方法,建立外源性干擾Fbxw7表達的細胞,觀察其對肝癌細胞轉(zhuǎn)移、侵襲能力的影響,反向驗證Fbxw7對肝癌細胞的生物學(xué)功能的影響。5.通過皮下荷瘤模型以及尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移模型,在體內(nèi)研究差異化表達Fbxw7的肝癌細胞的功能。6.通過Real-Time PCR方法檢外源性差異表達Fbxw7后EMT相關(guān)基因的改變情況。7.利用不同炎癥因子刺激,檢測差異化表達Fbxw7對不同炎癥信號通路的影響。8.通過Real-Time PCR及Western blot方法檢測Fbxw7對TGF-β信號通路上游及下游的影響,另外通過轉(zhuǎn)移、侵襲實驗在體內(nèi)驗證其對細胞功能的影響。9.通過免疫共沉淀實驗研究Fbxw7與Slug的相互作用情況,利用降解實驗以及共轉(zhuǎn)染實驗研究Fbxw7對Slug降解的促進作用及方式;通過細胞免疫熒光實驗研究Fbxw7與Slug共定位情況。實驗結(jié)果:1.大多數(shù)病人肝癌組織中Fbxw7表達水平低于癌旁組織,而癌栓組織中Fbxw7表達水平極低,肝臟組織中Fbxw7α亞型表達最多。2.患者肝癌組織中的Fbxw7表達水平越高預(yù)后越好,呈現(xiàn)負相關(guān),并且低表達的Fbxw7與患者的AFP、腫瘤包膜和TNM分級顯著相關(guān)。3.肝癌細胞系中過表達Fbxw7能夠減慢肝癌細胞的增殖,減少細胞克隆形成和成球數(shù)量,減少細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲數(shù)量。4.肝癌細胞系中干擾Fbxw7后,增加了肝癌細胞的增殖,增加了細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲數(shù)量。5.過表達Fbxw7能減小肝癌細胞體內(nèi)荷瘤的體積以及重量,并且能夠明顯減少肝癌細胞肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量。6.過表達Fbxw7能減弱炎癥信號通路的反應(yīng),降低EMT相關(guān)基因的表達。7.Fbxw7能夠通過抑制TGF-β信號通路上下游,進而影響肝癌細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。8.Fbxw7能夠通過降解Slug從另一方面抑制肝癌細胞轉(zhuǎn)移和侵襲。實驗結(jié)論:本研究通過外源性差異化表達Fbxw7在體內(nèi)和體外研究發(fā)現(xiàn),Fbxw7能夠負向調(diào)節(jié)肝癌細胞的增殖、克隆形成、轉(zhuǎn)移、侵襲和成球能力;Fbxw7通過對TGF-β信號通路的上下游的負向調(diào)控以及促進Slug的降解,參與調(diào)節(jié)肝癌細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。此外,Fbxw7的表達水平與病人的術(shù)后生存及臨床預(yù)后負相關(guān),提示其可以成為肝癌預(yù)后的一個因素。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王勇姿,俞超芹,凌昌全,衛(wèi)立辛;肝癌細胞系的研究概況[J];上海醫(yī)學(xué);2000年02期

2 王蓬,陳孝平,PBSLai,CK Leow,Joseph W Y Lau;二十碳五烯酸對三種肝癌細胞系作用的實驗研究[J];中華普通外科雜志;2001年01期

3 彭林,王衛(wèi)東,孫建,簡志祥,杜嘉林,區(qū)金銳;穩(wěn)定表達促血管生成素基因肝癌細胞系的建立及產(chǎn)物的檢測[J];廣東醫(yī)學(xué);2003年07期

4 趙蕩;陳宏武;許磊;劉飛勇;;不同時期肝癌免疫殺傷腫瘤細胞效應(yīng)探討[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2006年S1期

5 郭曉林;姜雅秋;金清龍;;多藥耐藥相關(guān)蛋白-3表達與肝癌耐藥的相關(guān)性[J];中國老年學(xué)雜志;2010年11期

6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細胞系的建立[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1978年10期

7 陸榮華;陳尊器;陳瑞銘;;人體肝癌細胞系體外惡性浸潤行為的研究[J];細胞生物學(xué)雜志;1982年02期

8 張志培,施新猷,李六金,劉雪松,江遜,彭磊,趙佐慶;小鼠免疫力對接種人類肝癌細胞系9724生長的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2001年07期

9 張志仁,徐順清,周宜開,任恕,劉志偉,呂斌,徐永俊;一株受二VA英類化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)表達的螢光素酶肝癌細胞系[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2001年06期

10 董琳,王桂珍;從分子基因水平開展中醫(yī)藥防治肝癌的研究[J];甘肅中醫(yī);2002年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 符兆英;劉凱歌;徐光華;;肝癌細胞系中乙型肝炎病毒x蛋白與缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達的研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

2 張朵;朱海英;謝東莆;胡以平;;肝癌細胞中存在SP細胞[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

3 汪謙;曹良啟;陳錫林;甄茂川;黃曉卉;傅新暉;;過氧化物酶增殖物激活受體活化抑制肝癌細胞遷移的研究[A];廣東省肝臟病學(xué)會2007年年會論文集[C];2007年

4 鄧欣;蔣小玲;李輝;吳其愷;聶廣;劉欽;;表達耐拉米夫定乙型肝炎病毒肝癌細胞系的建立[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

5 吳塵軒;杜智;朱爭艷;高英堂;王毅軍;只丹琮;孫泉;;肝癌免疫治療微環(huán)境和樹突狀細胞體外誘導(dǎo)的實驗研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2007年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2007年

6 趙主江;單云峰;樊紅;程欲超;成建;權(quán)艷梅;張建瓊;謝維;;DNMT3A siRNA穩(wěn)定表達載體的構(gòu)建及其沉默效率的鑒定[A];江蘇省遺傳學(xué)會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 田德安;;RhoA短發(fā)夾狀雙鏈RNA對肝癌細胞生物學(xué)行為的調(diào)控研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 高倩;;肝癌HepG2細胞系分泌的免疫抑制物質(zhì)的研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

9 代智;劉銀坤;馮巨濤;宋海燕;申華麗;張麗君;崔杰峰;;高低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞系差異糖蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會論文摘要論文集[C];2004年

10 張盛周;俞明月;謝晶;戴谷;李朝軍;;Met與Fas基因在肝癌組織和肝癌細胞系中的表達[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者 胡德榮;肝癌患者自噬性缺陷表型與預(yù)后不良緊密相關(guān)[N];健康報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王驥;凝集素富集糖肽聯(lián)合酶促~(18)O_3標(biāo)記的定量N-糖蛋白組學(xué)方法在肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)研究中的應(yīng)用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 劉坤;Bcl-2/Twist1蛋白互作在缺氧促進肝癌血管生成擬態(tài)形成中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 陳勇;蓽茇酰胺抑制肝癌細胞遷移/侵襲的作用及其機制[D];華中科技大學(xué);2015年

4 林鎮(zhèn)海;NR1D1通過DUOX2/MCP-1途徑募集巨噬細胞促進肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制及臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 丁坤;骨橋蛋白促進肝癌細胞順鉑耐藥的實驗研究[D];山東大學(xué);2016年

6 馬春亮;KLF17在肝癌中的作用及對肝癌預(yù)后的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

7 幸思忠;URG4/URGCP激活NF-κB通路調(diào)控肝細胞癌血管增生的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 范婭涵;Hedgehog信號通路調(diào)控Twist1表達促進肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移分子機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 張素潔;長非編碼RNA LncTSG1抑制肝癌轉(zhuǎn)移的功能及機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

10 梁東;Fbxw7促進Slug降解抑制TGF-β誘導(dǎo)的肝癌轉(zhuǎn)移[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田蕓蕓;人臍帶MSCs上清對肝癌細胞系HepG2影響的比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 徐辰;NKCC1促進肝癌細胞轉(zhuǎn)移的分子機制及其抑制劑用于抗腫瘤藥物的探索[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 楊霞;循環(huán)肝癌細胞CD147表型鑒定在指導(dǎo)利卡汀個體化治療中的應(yīng)用潛能探索[D];蘇州大學(xué);2015年

4 石志勇;FOXF2在肝癌中的表達及其對預(yù)后價值的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 陳楊;缺氧誘導(dǎo)肝癌細胞EMT及相關(guān)機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 唐俊;miR-612對肝癌細胞干性的調(diào)節(jié)作用及其機制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 李韻;miR-27b-5p促進肝癌細胞向肝癌干樣細胞轉(zhuǎn)化及其機制研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李霄;BMP4對肝癌VM形成影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

9 曹漪伊;HBV通過上調(diào)miR-331-3p的表達從而促進肝癌細胞的增殖[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

10 黃亞運;以熱休克蛋白為靶點的抗HBV藥物研究[D];湖北工業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號：2543099